本文選題：腸病毒　切入點(diǎn)：膜吸附-洗脫法　出處：《揚(yáng)州大學(xué)》2012年碩士論文

【摘要】：研究目的 針對腸道病毒(entero virus)、輪狀病毒(Rotavirus, RV)、腸道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)等水中常見腸病毒,建立相關(guān)熒光定量RT-PCR方法并進(jìn)行多種水體的實(shí)際檢測應(yīng)用。本課題的研究將為今后進(jìn)一步了解各種水體中腸病毒的分布奠定基礎(chǔ)。 研究意義 水是人們生命活動(dòng)的要素,人們要從各方面與水接觸如飲用水、洗滌用水、灌溉用水、工業(yè)用水等。隨著人口的增長,工農(nóng)業(yè)的發(fā)展,人們的需用水量在迅猛增加。然而,由于水資源保護(hù)工作不力,環(huán)境水體的各種污染問題也日益嚴(yán)重,其中,水體的病毒污染也不容忽視。水體的病毒污染可能導(dǎo)致水源性疾病的爆發(fā),其中介水傳播性病毒主要為腸病毒,它來源于水體的糞便污染,通過糞-口途徑傳播,可引起感染性腹瀉、甲肝、戊肝等法定傳染病。目前,細(xì)菌總數(shù)、大腸菌群、耐熱大腸菌群和大腸埃希氏菌是飲用水細(xì)菌學(xué)衛(wèi)生指標(biāo),但隨著近幾年有關(guān)在細(xì)菌學(xué)指標(biāo)合格的飲用水中檢出腸道病毒以及飲用水源受污染而導(dǎo)致病毒性腸道疾病暴發(fā)流行的報(bào)道不斷增多,表明細(xì)菌學(xué)指標(biāo)并不能完全指示腸道病毒的去除,細(xì)菌學(xué)指標(biāo)安全并不能代表飲用水的安全性。細(xì)菌具有細(xì)胞結(jié)構(gòu)而病毒無細(xì)胞結(jié)構(gòu),病毒的非細(xì)胞屬性使它對環(huán)境壓力的耐受比細(xì)菌強(qiáng)。同時(shí),在對消毒劑如氯的抗性上病毒強(qiáng)于細(xì)菌,因此,在常規(guī)水處理過程中,細(xì)菌的殺滅不能指示病毒的殺滅。當(dāng)病毒一旦穿透水處理過程并存活于飲用水中,則表明病毒性水媒傳播的可能性存在。美國、法國在飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中均規(guī)定腸道病毒的檢出為零,而在我國,尚未將病毒檢出列入相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)。因此,開展水中腸病毒的檢出工作對于今后我國飲用水衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)的提高是具有深刻的現(xiàn)實(shí)指導(dǎo)意義。 研究方法 利用TaqMan探針技術(shù)建立腸道病毒通用型(enterovirus, EV-U)、脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型(poliovirus, PV I)、輪狀病毒(Rotavirus, RV)、腸道腺病毒(enteric adenovirus, EAdV)的熒光定量RT-PCR檢測方法,并通過制備各種病毒的標(biāo)準(zhǔn)品,對病毒進(jìn)行準(zhǔn)確定量；同時(shí)對該方法的特異性、靈敏度、重復(fù)性進(jìn)行評估。通過PV Ⅰ加標(biāo)實(shí)驗(yàn)和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR技術(shù)檢測水中的PV Ⅰ病毒,比較用膜吸附-洗脫法和載陽電荷濾料法富集水中病毒的回收率和效果。利用建立起的EV-U、PVI、RV、EAdV熒光定量RT-PCR方法和病毒富集方法,檢測北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水中的病毒含量。 研究結(jié)果 本研究建立了基于TaqMan探針的實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法,能檢測腸道病毒、脊髓灰質(zhì)炎病毒Ⅰ型、輪狀病毒、腸道腺病毒。該方法特異性為100%,靈敏度分別達(dá)到102copies/μl,重復(fù)性好。三種病毒富集方法對具有不同載量病毒的加標(biāo)水樣分別進(jìn)行富集并計(jì)算回收率,載陽電荷濾料法不僅回收率最高,而且效果穩(wěn)定,回收率在91%-94%；而膜吸附-洗脫法的回收率次之,回收率僅為70%-80%。 利用建立起的EV-U檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的PV Ⅰ檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的RV檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水、出廠水出水,天津海河水和衛(wèi)津河水,均為陰性；利用建立起的EAdV檢測方法檢測3月份北京盧溝橋污水處理廠二沉池出水和出廠水出水為陽性,天津海河水和衛(wèi)津河水為陰性。
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【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2012
【分類號(hào)】：R123.1;X832

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1716813