本文選題：TCDD　切入點：神經(jīng)毒性　出處：《天津醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的:本研究旨在探討環(huán)境中廣泛存在的內(nèi)分泌干擾物2,3,7,8-四氯二苯并-對-二VA英(TCDD)對人星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞線粒體的影響,重點關(guān)注TCDD對兩種細胞的線粒體形態(tài)、細胞內(nèi)ATP含量、線粒體相關(guān)基因和蛋白表達的影響,研究TCDD對人神經(jīng)細胞線粒體的損傷作用,以探索TCDD對人神經(jīng)系統(tǒng)的毒性作用機制。方法:1.采用TCDD對星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞進行24h染毒處理。用MTS實驗檢測0-1000nM的TCDD染毒處理對星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞活性的影響。2.采用透射電鏡觀察0-100nM的TCDD染毒處理24h對星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的影響。3.檢測0-100nM的TCDD染毒處理24h對星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞內(nèi)ATP含量的影響。4.采用PCR Array技術(shù)檢測0-50nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞線粒體相關(guān)基因mRNA的表達水平。5.采用RT-PCR方法檢測0-100nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞TSPO、SH3GLB1、TOMM22、TOMM40L、SLC25A10、SLC25A27、MFN1和MFN2基因mRNA的表達水平。6.采用Western Blot實驗檢測0-100nM的TCDD染毒處理24h后,星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞PBR和MFN2的蛋白表達水平。結(jié)果:1.MTS檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)0-1000nM TCDD染毒處理24h對星形膠質(zhì)細胞和SHSY5Y細胞活性沒有明顯抑制作用。2.0-100nM的TCDD染毒處理24h后用透射電鏡觀察星形膠質(zhì)細胞和SHSY5Y細胞線粒體超微結(jié)構(gòu)的變化,發(fā)現(xiàn)與對照組相比,兩種細胞線粒體嵴數(shù)目減少,線粒體出現(xiàn)腫脹和空泡化改變。表明TCDD可影響星形膠質(zhì)細胞和SHSY5Y細胞的線粒體正常形態(tài)。3.0-100nM TCDD染毒處理24h后檢測星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞內(nèi)ATP含量發(fā)現(xiàn),與對照組相比,TCDD染毒處理使星形膠質(zhì)細胞內(nèi)ATP含量有上升趨勢,100nM TCDD染毒處理組ATP含量升高具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。在SH-SY5Y細胞中,TCDD染毒處理使細胞內(nèi)ATP含量呈先升高后降低趨勢,100nM TCDD染毒處理使細胞內(nèi)ATP含量下降有統(tǒng)計學意義(P0.05)。4.PCR Array檢測線粒體相關(guān)基因的mRNA表達情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細胞中1nM TCDD染毒處理組有12個基因mRNA表達水平降低;50nM TCDD染毒處理組有11個基因mRNA表達水平降低。SH-SY5Y細胞中1nM TCDD染毒處理組有12個基因mRNA表達水平降低;50n M TCDD染毒處理組有2個基因mRNA表達水平降低。5.本次研究選擇8個基因作為目的基因,采用RT-PCR技術(shù)檢測目的基因mRNA表達情況。實驗結(jié)果顯示,與對照組相比,星形膠質(zhì)細胞中,100nM TCDD染毒處理組TSPO基因的mRNA表達水平升高(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SH3GLB1基因mRNA表達水平下降(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組TOMM22基因mRNA表達水平下降(P0.05)。1nM、10nM、100nM TCDD染毒處理組TOMM40L基因的mRNA表達水平下降(P0.05)。1nM、10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組SLC25A10基因的mRNA表達水平均有所下降(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SLC25A27基因的mRNA表達水平升高(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN1基因mRNA表達水平下降(P0.05)。1nM、10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN2基因的mRNA表達水平下降(P0.05)。與對照組相比,在SH-SY5Y細胞中,1nM、10nM、50nM和100nM TCDD染毒處理組TSPO的mRNA表達水平升高(P0.05)。1nM、50nM和100nM TCDD染毒處理組SH3GLB1基因mRNA表達水平下降(P0.05)。1nM和10nM TCDD染毒處理組TOMM22基因mRNA表達水平下降(P0.05)。10nM和100nM TCDD染毒處理組SH-SY5Y細胞TOMM40L的mRNA表達水平下降(P0.05)。50nM和100nM TCDD染毒處理組SLC25A10的mRNA表達水平下降(P0.05)。100nM TCDD染毒處理組SLC25A27的mRNA表達水平升高(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN1基因m RNA表達水平下降(P0.05)。10nM、50nM、100nM TCDD染毒處理組MFN2基因mRNA表達水平下降(P0.05)。6.Western Blot檢測PBR和MFN2的蛋白表達水平,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對照組相比,在星形膠質(zhì)細胞中,1nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達水平下降(P0.05),10nM和100nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達水平上升,且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。10nM和100nM TCDD染毒處理組MFN2蛋白表達水平下降且有統(tǒng)計學意義(P0.05)。與對照組相比,在SH-SY5Y細胞中,1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理組PBR蛋白表達水平均有下降趨勢,但無統(tǒng)計學意義。1nM、10nM和100nM TCDD染毒處理組MFN2蛋白表達水平下降,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1.實驗濃度范圍內(nèi)TCDD染毒處理對星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞的活性無抑制作用,但對兩種細胞的線粒體正常形態(tài)有影響。2.TCDD可以使星形膠質(zhì)細胞內(nèi)ATP含量升高,通過增加細胞間信號分子ATP的釋放,調(diào)節(jié)自身和神經(jīng)元活動。在SH-SY5Y細胞中,TCDD可以使細胞內(nèi)ATP含量降低,影響線粒體的正常氧化磷酸化過程。3.TCDD可以抑制星形膠質(zhì)細胞和SH-SY5Y細胞中SH3GLB1、TOMM22、TOMM40L、SLC25A10、MFN1和MFN2基因mRNA的表達,抑制MFN2蛋白的表達,促進TSPO和SLC25A27基因m RNA的表達以及星形膠質(zhì)細胞中PBR蛋白的表達,表明TCDD對兩種神經(jīng)細胞具有損傷影響,可能激活了線粒體的自我保護機制,并且影響兩種細胞線粒體的形態(tài)、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運和動力學等過程。
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【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：1574862