本文關鍵詞： 反式脂肪酸 認知功能 氧化應激 神經(jīng)遞質　出處：《山東大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：[研究目的]反式脂肪酸(trans-fatty acids,TFA)是在反式構型中具有至少一個非共軛雙鍵的不飽和脂肪酸[1]。因可長期保存及其理化性質的穩(wěn)定性和半溶性,反式脂肪酸被廣泛應用于食品加工行業(yè),如各類油炸食品,甜點等。大量研究證實,反式脂肪酸的過量攝入會影響人體的生長發(fā)育;此外,反式脂肪酸的過量攝入與動脈粥樣硬化(atherosclerosis,AS)、冠心病(coronary heart disease,CHD)、2型糖尿病及癌癥等疾病相關。有研究表明,反式脂肪酸具有一定的神經(jīng)毒性,可穿過血腦屏障,在額葉皮層、海馬、紋狀體等處的神經(jīng)細胞內沉積,并與以漸進性記憶障礙、認知功能障礙為特征的阿爾茲海默病(Alzheimer's disease,AD)表現(xiàn)出一定的相關性。然而,反式脂肪酸是否導致認知功能障礙及其相關機制并不明確。因此,我們采用反式脂肪酸灌胃12周,通過Morris水迷宮實驗,觀察反式脂肪酸對小鼠學習記憶的影響;通過蘇木素-伊紅染色觀察反式脂肪酸對小鼠海馬形態(tài)學的影響;采用生物化學實驗檢測反式脂肪酸染毒小鼠大腦皮層超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、過氧化氫酶(catalase,CAT)的活力以及脂質過氧化蛋白加合物丙二醛(malondialdehyde,MDA)的含量變化;檢測反式脂肪酸染毒小鼠腦組織Na+/K+-ATP酶、Ca2+/Mg2+-ATP酶、乙酰膽堿酯酶(acetylocholinesterase,AchE)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)的活力值;采用高效液相色譜法檢測氨基酸類神經(jīng)遞質:谷氨酸(glutamic acid,Glu)、甘氨酸(glycine,Gly)、天門冬氨酸(aspartic acid,Asp)、γ-氨基丁酸(y-aminobutyric acid,GABA)及�；撬�(taurine,Tau)的含量。探討反式脂肪酸對小鼠認知功能的影響,及其與大腦氧化應激和氨基酸類神經(jīng)遞質的關系。[研究方法]1.實驗動物分組及處理:選取SPF級雄性昆明小鼠56只,體重(18-22)g,分籠飼養(yǎng),進食飲水自由。適應性飼養(yǎng)1周后,隨機分為4組并均衡體重,分別為對照組和低、中、高劑量反式脂肪酸染毒組,每組14只。各劑量反式脂肪酸染毒組動物分別給予25mg/kg、50mg/kg、100mg/kg反式脂肪酸,對照組給予等體積的玉米油。所有實驗動物均采用灌胃方式進行染毒,染毒容量均為0.1ml/10g,每周6次,連續(xù)染毒12周。每周稱量并記錄小鼠體重,以調整灌胃劑量。2.小鼠認知功能測定:反式脂肪酸灌胃結束后,每組隨機選取12只小鼠進行連續(xù)6天的Morris水迷宮測試(第一天為訓練,不記錄數(shù)據(jù))。通過定位航行實驗和空間探索實驗對小鼠的認知功能進行綜合評價。其中,定位航行實驗通過測定小鼠的逃避潛伏期和游泳總路程反應實驗小鼠的學習能力;空間探索實驗通過測定穿越平臺次數(shù)反映小鼠的記憶能力。3.小鼠腦組織損傷病理形態(tài)學觀察:制備小鼠大腦的石蠟切片,采用蘇木素-伊紅(HE)染色法檢測小鼠海馬的形態(tài)學變化。4.小鼠大腦氧化應激指標檢測:按照相關試劑盒的說明測定腦組織中SOD、GSH-Px、CAT的活力值以及MDA的含量。5.小鼠腦組織ATP酶活力檢測:按照相關試劑盒說明檢測Na+/K+-ATP酶和Ca2+/Mg2+-ATP 酶活力值。6.小鼠腦組織AchE、NOS活力檢測:制備小鼠大腦組織勻漿,按照相關試劑盒說明,檢測小鼠腦組織AchE和NOS活力值的變化。7.小鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質檢測:采用高效液相色譜-二極管陣列檢測器檢測小鼠腦組織中Glu、Gly、Asp、GABA、Tau的含量。[結果]1.反式脂肪酸染毒對小鼠一般生長發(fā)育的影響對照組及各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠一般狀況良好,小鼠體重隨實驗進行緩慢增加,各組體重增量差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。2.反式脂肪酸對小鼠學習記憶功能的影響Morris水迷宮數(shù)據(jù)顯示:隨訓練時間的延長,各實驗組小鼠逃避潛伏期及游泳總路程均呈下降趨勢,各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠與對照組相比逃避潛伏期、游泳總路程、平均游泳速度、穿越平臺次數(shù)等各指標差異均無統(tǒng)計學意義(p0.05)。3.反式脂肪酸染毒對小鼠海馬結構影響的形態(tài)學觀察海馬形態(tài)學觀察顯示:與對照組相比,各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠海馬組織中,組成海馬外形的神經(jīng)細胞線變得細且模糊。高倍鏡顯示,海馬CA2、CA3區(qū)神經(jīng)細胞數(shù)不同程度減少,排列疏松。4.反式脂肪酸染毒對小鼠大腦皮層SOD、GSH-Px、CAT活力及脂質過氧化蛋白加合物MDA含量的影響與對照組相比,各劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px、CAT活力均降低(p0.05),而脂質過氧化蛋白加合物MDA含量明顯升高(p0.05)。反式脂肪酸各劑量組間各酶活力及MDA含量差異無統(tǒng)計學意義(p0.05)。5.反式脂肪酸染毒對小鼠腦組織Na+/K+-ATP酶和Ca2+/Mg2+-ATP酶活力值的影響與對照組相比,低、中、高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織Na+/K+-ATP和 Ca2+/Mg2+-ATP 酶活力值降低(p0.05)。6.反式脂肪酸對小鼠腦組織AchE和NOS活力值的影響與對照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織AchE活力值降低(p0.05)。小鼠腦組織中,高劑量反式脂肪酸染毒組NOS活力值與對照組相比顯著升高(p0.05)。低、中劑量反式脂肪酸染毒組NOS活力值與對照組相比呈增高趨勢,但無統(tǒng)計學差異(p0.05)。7.反式脂肪酸對小鼠腦組織氨基酸類神經(jīng)遞質含量的影響與對照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中Glu,Gly,Asp,GABA,Tau含量升高(p0.05);高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中 Glu,Gly,Asp,GABA,Tau含量也呈升高趨勢(p0.05)。與對照組相比,低、中劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中谷氨酸與γ-氨基丁酸的比值增加(p0.05);高劑量反式脂肪酸染毒組小鼠腦組織中谷氨酸與γ-氨基丁酸的比值增加(p0.05)。[結論]1.大腦是反式脂肪酸毒作用的敏感靶器官,反式脂肪酸暴露可導致小鼠海馬形態(tài)發(fā)生變化。2.反式脂肪酸可導致小鼠腦組織抗氧化系統(tǒng)損傷。3.反式脂肪酸可以影響小鼠腦組織AchE和NOS活力。4.反式脂肪酸具有興奮性神經(jīng)毒性,并且能夠影響ATP酶。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R114

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本文編號：1524128