本文關(guān)鍵詞：廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉病人隱孢子蟲和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染的分子流行病學(xué)研究　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 腹瀉 隱孢子蟲 藍(lán)氏賈第鞭毛蟲 巢式-PCR 分子流行病學(xué)

【摘要】：研究背景： 人體腸道感染性腹瀉大多是由細(xì)菌、病毒引起,但近年來由腸道寄生性原蟲引起的腹瀉逐漸增多。腸道寄生原蟲屬于原生動物亞界,廣泛分布于自然界的各種生態(tài)環(huán)境中,不少原蟲既可感染人類,又可寄生于某些動物,大多以水作為主要傳播載體,是引起腹瀉的主要病原體之一。隱孢子蟲(Cryptosporidium)和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲(Giardia lamblia,簡稱賈第蟲)作為可感染包括人在內(nèi)的大多數(shù)動物胃腸道的寄生性原蟲,可引起宿主輕重不一的感染,具有明顯的發(fā)病率和病死率。免疫功能正常的個體,感染了隱孢子蟲和賈第蟲(以下合稱為兩蟲)可導(dǎo)致急性、自身限制性腹瀉；但對于免疫力較弱者,尤其嬰幼兒、免疫功能缺陷者則可引起嚴(yán)重腹瀉,甚至死亡。隱孢子蟲病(Cryptosporidiosis)和賈第蟲病(Giardiasis)的發(fā)生和傳播主要通過糞-口傳播,多種途徑感染,包括人-人接觸,動物-人接觸,攝入被卵(包)囊污染的水、食物,與污染的環(huán)境物接觸等。 病原體特征有待深入研究目前國外對隱孢子蟲和賈第蟲的病原學(xué)特征、流行病學(xué)、基因組學(xué)等已進(jìn)行了大量的研究,但國內(nèi)對其流行病調(diào)查研究仍僅停留在簡單粗糙的檢出水平上,尚未見隱孢子蟲病和賈第蟲病分子流行病學(xué)和基因分型的系統(tǒng)報道,相關(guān)研究工作還有待進(jìn)一步加強(qiáng)。 病原體檢測方法有新進(jìn)展檢測隱孢子蟲和賈第蟲的方法很多,包括病原學(xué)檢測、免疫學(xué)檢測和分子生物學(xué)檢測等。應(yīng)用顯微鏡對糞便標(biāo)本進(jìn)行病原學(xué)檢測多年來被認(rèn)為是檢測隱孢子蟲和賈第蟲的“黃金方法”,然而該方法極易漏檢,僅適用于有腹瀉癥狀且排出卵(包)囊量較大的患者,并且特異性低、費(fèi)時、費(fèi)力；而免疫學(xué)檢測由于操作復(fù)雜且不能用于早期診斷,其應(yīng)用也受到了一定限制。目前,分子生物學(xué)方法已廣泛應(yīng)用于隱孢子蟲和賈第蟲的檢測,該方法相對其他傳統(tǒng)方法除了具有高靈敏性、特異性強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)外,還可以進(jìn)行蟲種、基因型及亞基因型的區(qū)分,并且能同時檢測大量樣本。研究表明巢式聚合酶鏈反應(yīng)(Nested PCR)檢測隱孢子蟲和賈第蟲的敏感性可以達(dá)到1個卵(包)囊,無論是檢測環(huán)境樣本還是臨床樣本,此方法相對于傳統(tǒng)的方法在敏感性特異性上均有了較大的提高。既往雖然對隱孢子蟲和賈第蟲病例報道少,但實(shí)際病人或感染者眾多,只是無癥狀的或癥狀輕的居多,其危害尚未引起足夠的重視。再者以往傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室鏡檢方法檢出率較低,報道的感染率并不能反映其實(shí)際感染情況,因此,基于靈敏性高特異性強(qiáng)的檢出方法,連續(xù)長期地對隱孢子蟲和賈第蟲的感染情況進(jìn)行監(jiān)測,能為進(jìn)一步研究提供豐富可靠的資料。 流動人口兩病的防控有待加強(qiáng)廣州地區(qū)旅游業(yè)發(fā)達(dá),人口密集且流動性大,城區(qū)和城鄉(xiāng)結(jié)合部人員構(gòu)成復(fù)雜,經(jīng)濟(jì)條件、知識水平、行為衛(wèi)生習(xí)慣等參差不齊,而感染性疾病中的腹瀉發(fā)病率一直居高不下。本研究分別采用病原學(xué)檢測方法和Nested PCR法對廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院2012年6月～2013年5月期間就診的腹瀉病人進(jìn)行隱孢子蟲病和賈第蟲病的分子流行病學(xué)調(diào)查,希望能了解隱孢子蟲和賈第蟲在廣州地區(qū)的感染和流行現(xiàn)況,估計廣州地區(qū)是否存在暴發(fā)流行的潛在隱患,研究其分子流行病學(xué)和基因型分型特征,為我國隱孢子蟲和賈第蟲的流行病學(xué)調(diào)查提供全面系統(tǒng)的背景資料。 研究目的： 1.了解2012年6月～2013年5月廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院門診腹瀉病人隱孢子蟲和賈第蟲感染狀況及流行病學(xué)特征,完善我國原蟲性腹瀉的流行病學(xué)基礎(chǔ)資料； 2.了解該地區(qū)腹瀉病人隱孢子蟲和賈第蟲的基因型及亞基因型別,探討其流行優(yōu)勢株,明確分子特征及基因型分布情況； 3.為廣州地區(qū)兒童和成人原蟲感染性腹瀉的研究提供豐富的背景資料。 研究方法： 1.標(biāo)本收集： 收集2012年6月至2013年5月期間在廣州市某三甲醫(yī)院及城中村社區(qū)醫(yī)院門診就診的348例年齡14歲及以下腹瀉兒童和110例年齡18歲及以上的成人腹瀉患者的糞便標(biāo)本、人口學(xué)資料及流行病學(xué)資料。 2.標(biāo)本處理方法： 每份糞便標(biāo)本取5-10g或5～10ml,加入2.5%重鉻酸鉀溶液,震蕩后制成10%的懸液,分裝三管后4℃保存?zhèn)溆谩?3.標(biāo)本中隱孢子蟲和賈第蟲檢測方法：使用改良抗酸染色法和盧戈氏染色法對所有樣本分別進(jìn)行隱孢子蟲和賈第蟲顯微鏡檢查；利用Nested PCR法,對所有樣本以18SrRNA基因和磷酸丙糖轉(zhuǎn)移酶(TPI)基因?yàn)槟康幕蚍謩e進(jìn)行隱孢子蟲和賈第蟲感染的檢測；對PCR陽性產(chǎn)物進(jìn)行測序,應(yīng)用BLAST軟件將測序結(jié)果在GenBank上尋找各陽性株的同源序列,使用MEGA5.0軟件的鄰接法(neighbour-joining method, NJ)構(gòu)建系統(tǒng)進(jìn)化樹,分析隱孢子蟲和賈第蟲的基因型和亞基因型,判斷其流行優(yōu)勢株。 4.統(tǒng)計分析方法：采用Epidata2.1軟件對調(diào)查數(shù)據(jù)進(jìn)行雙份錄入,運(yùn)用統(tǒng)計軟件SPSS13.0對收集的資料進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,分析廣州地區(qū)隱孢子蟲病和賈第蟲病的流行病學(xué)特征,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α為0.05。 結(jié)果： 1.2012年6月至2013年5月共收集廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院14歲及以下腹瀉兒童糞便標(biāo)本和問卷共348份。腹瀉兒童監(jiān)護(hù)人文化程度以大專及以上為主,占69.9%(226/323),職業(yè)以辦公室白領(lǐng)占最多,為27.7%(89/321)。 2.調(diào)查了110名18歲及以上符合條件的成人腹瀉患者,平均年齡(38.91±16.62)歲�；颊呶幕潭纫源髮＜吧蠟橹�,為62.7%(69/110),職業(yè)分布以辦公室白領(lǐng)占最多,為22.7%(25/110)。 3.腹瀉兒童隱孢子蟲的陽性率為3.45%(12/348),發(fā)病高峰以3歲內(nèi)嬰幼兒為主。檢出季節(jié)有兩個高峰,為3月～4月和11月～12月。陽性患兒83%有飯前便后洗手但有67%平時有吸吮手指的習(xí)慣,生活飲用水種類以自來水為主。檢出的12株隱孢子蟲經(jīng)測序分型,8株為C.hominis,4株為C.parvum,其中Ia亞型6株,Ib亞型2株,Ⅱa亞型3株,Ⅱd亞型1株。 4.腹瀉成人隱孢子蟲的陽性率為1.8%(2/110),兩例均為中老年人,未能發(fā)現(xiàn)明顯季節(jié)分布特點(diǎn)。2個分離株均為C.hominis和Ⅰa基因亞型,未發(fā)現(xiàn)其他基因型別。 5.腹瀉兒童賈第蟲的陽性率為4.60%(16/348),主要感染3歲以內(nèi)嬰幼兒,以2-3歲年齡段檢出率最高,檢出高峰為7月至10月。75%兒童平時有飯前便后洗手,但有69%平時有吸吮手指的習(xí)慣,生活飲用水種類以自來水為主。16株賈第蟲經(jīng)測序分型,14個分離株為集聚型A,2個分離株為集聚型B；集聚體A中9個為A-Ⅰ亞型,5個為A-Ⅱ亞型,而2個集聚體B均為B-Ⅲ亞型。 6.腹瀉成人賈第蟲的陽性率為3.6%(4/110),年齡分布除了18～30歲間,其余年齡段均有檢出,檢出季節(jié)集中在8-10月夏秋季節(jié),其他月份未有檢出。4份陽性產(chǎn)物經(jīng)測序,均為集聚型A,未發(fā)現(xiàn)其他基因型。集聚體A中3個為A-Ⅰ亞型,1個為A-Ⅱ亞型。 7.兩種診斷方法檢測腹瀉患者的隱孢子蟲和賈第蟲感染的檢出率有不同,PCR法比染色法的檢出率高。 結(jié)論： 1.原蟲性腹瀉也是引起兒童和成人腹瀉的重要病原體,就算是經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)的廣州地區(qū),兒童和成人均存在隱孢子蟲和賈第蟲的感染,人群分布主要感染3歲以內(nèi)的兒童為主。隱孢子蟲的檢出高峰于春季和冬季,賈第蟲在夏秋季節(jié)檢出最高。 2.引起廣州市哨點(diǎn)醫(yī)院腹瀉兒童和成人隱孢子蟲病的10株為C.hominis,4株為C.parvum,流行株可能為C.hominis及其Ia基因亞型。賈第蟲18個分離株為集聚型A,2個分離株為集聚型B,可能主要流行集聚型A。兩蟲導(dǎo)致腹瀉的基因型別多樣,應(yīng)引起重視。 3.兩種診斷方法檢測腹瀉患者的隱孢子蟲和賈第蟲感染的檢出率有不同,PCR法比鏡檢染色法的檢出率高,且能分析其種屬和基因型別。運(yùn)用分子生物學(xué)方法能更準(zhǔn)確地揭示兩蟲的實(shí)際感染情況。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R181.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 王中全,崔晶;賈第蟲病流行病學(xué)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(寄生蟲病分冊);2005年03期

2 趙杰;張龍現(xiàn);李逐波;;隱孢子蟲病研究進(jìn)展[J];河南畜牧獸醫(yī)(綜合版);2008年05期

3 魏躍紅;楊智聰;康燕;王玉林;謝華萍;解朝軍;羅雷;;廣州市兒童感染性腹瀉流行因素分析[J];中華疾病控制雜志;2011年02期

4 朱惠麗;張龍現(xiàn);寧長申;黨海亮;李家誠;;人獸共患隱孢子蟲種類及基因型[J];寄生蟲與醫(yī)學(xué)昆蟲學(xué)報;2007年01期

5 蔡茹;李朝品;王健;許禮發(fā);賀驥;;淮南地區(qū)腹瀉患者隱孢子蟲感染的調(diào)查[J];熱帶病與寄生蟲學(xué);2003年01期

6 杜學(xué)利;戈建軍;秦圓方;孟睿;劉云;儲凱;侯敏;楊萍燦;吳�，|;;南京市兒童醫(yī)院門診兒童隱孢子蟲病的流行病學(xué)調(diào)查[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2009年04期

7 李治有;四川省華鎣市藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染情況的調(diào)查[J];寄生蟲病與感染性疾病;2003年01期

8 朱名勝;宋明華;;十堰市幼兒園兒童隱孢子蟲感染情況[J];中國學(xué)校衛(wèi)生;2007年11期

9 朱名勝;朱敬;王紹基;宋明華;;十堰市兒童藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染情況調(diào)查[J];中國學(xué)校衛(wèi)生;2009年12期

10 張龍現(xiàn),蔣金書,劉群,寧長申,朱引潔,吳紹強(qiáng);巢式PCR檢測隱孢子蟲卵囊的研究[J];畜牧獸醫(yī)學(xué)報;2003年05期

，

本文編號：1370193