發(fā)布時間：2017-12-29 14:33

  本文關鍵詞：硫酸鈹致人胚肺成纖維細胞凋亡機制的研究　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2014年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：通過觀察不同濃度硫酸鈹（BeSO4）對人胚肺成纖維細胞（MRC-5）凋亡率、凋亡相關基因表達水平、胞內三磷酸肌醇受體（IP3R）及其配體肌醇三磷酸（IP3）含量以及胞內鈣離子濃度([Ca2+]i)的改變，探討B(tài)eSO2+4是否通過IP3R Ca通道影響細胞凋亡，同時觀察IP3R拮抗劑和激活劑干預后人胚肺細胞凋亡率變化。 方法：體外培養(yǎng)MRC-5細胞，分為空白對照組、低中高BeSO4染毒組、BeSO4+2-APB組及BeSO4+IP3組等6組。BeSO4低、中、高劑量組濃度分別為1、10、100μmol/L，2-APB組和IP3組劑量為10μmol/L+10μmol/L BeSO4。細胞生長至對數(shù)生長期，達到細胞密度后，根據(jù)實驗需求，加入藥物分別培養(yǎng)24h和48h后收集細胞。進行以下實驗：1.流式細胞術檢測細胞凋亡率；2.實時熒光定量逆轉錄-聚合酶鏈反應（RT-PCR）法檢測IP3RⅢ、bcl-2、bax、Caspase-3mRNA的表達；3.ELISA法測定細胞內IP3RⅢ及IP3含量變化；4.激光共聚焦法檢測胞內[Ca2+]i。 結果： 1.24h和48h BeSO4低、中、高劑量組與同時相空白對照組相比，MRC-5細胞凋亡率有不同程度下降（P㩳0.01）；BeSO4低、中、高劑量組染毒24h和48h后與同時相空白對照組相比，MRC-5細胞Bcl-2mRNA表達升高，Bax和Caspase-3mRNA表達降低，Bcl-2/Bax比值升高（P㩳0.05，P㩳0.01）； 2.24h和48h BeSO4低、中、高劑量組與同時相空白對照組相比，MRC-5細胞IP3RⅢ mRNA表達均升高（P0.05，P㩳0.01）；但ELISA結果未發(fā)現(xiàn)相應組別IP3RⅢ蛋白含量增多（P0.05）；其配體IP3在BeSO4染毒MRC-5細胞后較同時相空白對照組有不同程度升高，但差異無顯著性（P0.05）； 3.24h BeSO4高劑量組與同時相空白對照組相比，Ca2+含量升高（P0.05）；48h BeSO4中、高劑量組與同時相空白對照組相比，Ca2+含量降低（P0.05）； 4.拮抗劑和激活劑干預影響：24h和48h BeSO4+2-APB組與同時相BeSO4中劑量組相比，MRC-5細胞凋亡率下降（P㩳0.05），且低于同時相空白對照組（P㩳0.01）；24h和48hBeSO4+IP3組與同時相BeSO4中劑量組相比，MRC-5細胞凋亡率升高（P㩳0.05），但仍低于同時相空白對照組（P㩳0.01）；24h和48h BeSO4+IP3組與相應時相BeSO4中劑量組相比，MRC-5細胞IP3含量均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P㩳0.01）；24h和48h BeSO4+2-APB組與同時相BeSO4中劑量組相比，，Ca2+含量降低（P0.01），且低于同時相空白對照組組（P0.05，P0.01）；24h和48h BeSO4+IP3組與同時相BeSO4中劑量組，Ca2+含量升高（P0.05，P0.01）。 結論：BeSO4可導致MRC-5細胞發(fā)生凋亡異常,其機制可能與其對MRC-5細胞的Bcl-2、Bax、Caspase-3mRNA表達量異常及胞內Ca2+濃度的異常改變有關；BeSO4染毒后胞內Ca2+濃度通過內質網(wǎng)IP23R Ca+通路調節(jié)，IP3模擬物對其凋亡抑制有一定的改善作用。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R114

【參考文獻】

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本文編號：1350632