本文關(guān)鍵詞：花生過敏原酶聯(lián)免疫分析方法的建立

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【摘要】：本論文采用硫酸銨分級(jí)沉淀法提取制備了花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白,并免疫動(dòng)物制備了兔、鼠多克隆抗體。針對(duì)花生總蛋白兔、鼠抗血清采用了免疫印跡法分析,證明兔多抗可識(shí)別分子量為63.5、61、57、17和15kDa的過敏原蛋白,鼠多抗可識(shí)別63.5、61、57kDa過敏原蛋白。 優(yōu)化建立了花生總蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫方法,IC5o為1.18μg/mL。 分別針對(duì)花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白優(yōu)化建立了雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析方法。花生總蛋白的優(yōu)化條件為：捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,花生總蛋白從4μg/mL開始1.5倍梯度稀釋,共7個(gè)梯度,檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1：25000,HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1：10000倍稀釋,37℃顯色20mmin,檢測(cè)限為40.48ng/mL。且利用花生總蛋白抗體檢測(cè)Ara h1過敏原蛋白,建立了雙抗體夾心ELISA方法,檢測(cè)限為8.38ng/mL。 Ara h1過敏原蛋白的優(yōu)化條件為：捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔,封閉液為0.5%脫脂乳粉,Ara h1過敏原蛋白從1μg/mL開始2倍梯度稀釋,共7個(gè)梯度,檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1：40000,HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1：10000倍稀釋,37℃顯色20mmin,檢測(cè)限為1.38ng/mL。這兩種雙抗體夾心免疫檢測(cè)方法與14種植物性蛋白均沒有交叉反應(yīng)。 這兩種夾心ELISA方法的板間變異為2.02%-12.00%、板內(nèi)變異為0.68%-4.56%,說明所建立的ELISA方法具有良好的重現(xiàn)性。選擇餅干、面包和牛奶樣品,分別采用花生總蛋白和Ara h1過敏原蛋白雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè),樣品添加回收率分別達(dá)87.14%-154.80%、70.30～110.05%。
【學(xué)位授予單位】：天津科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R155.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1228404