本文關(guān)鍵詞：飲水?dāng)z入三氯乙烯致小鼠肝臟損傷中PPARs表達(dá)的研究

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【摘要】：研究背景三氯乙烯（trichloroethylene，TCE）是一種工業(yè)上常用的有機(jī)溶劑，廣泛用作金屬表面去污劑。由于被大量應(yīng)用但處置能力有限，TCE已大量進(jìn)入大氣、土壤以及地下水系統(tǒng)成為一種重要的環(huán)境污染物。長(zhǎng)期低劑量暴露于TCE可致肝毒性，同時(shí)可引起機(jī)體免疫系統(tǒng)的失衡。研究表明TCE經(jīng)肝臟代謝后生成具有過氧化物酶體增殖物（peroxisome proliferator，，PP）特性的代謝物，繼而激活PP的受體過氧化物酶體增殖物活化受體（peroxisome proliferator activated receptors，PPARs），PPARs與許多環(huán)境毒物所致的肝臟毒性及機(jī)體的免疫應(yīng)答存在密切聯(lián)系，但在飲水?dāng)z入TCE所致肝毒性中PPARs的表達(dá)及其作用仍不清楚。 目的本研究通過檢測(cè)經(jīng)飲水?dāng)z入TCE后小鼠肝臟損傷情況及肝臟中PPARs表達(dá)，探討TCE暴露引起小鼠肝臟損傷中PPARs的表達(dá)情況以及時(shí)間和劑量效應(yīng)關(guān)系，為闡明環(huán)境TCE暴露危害及其分子機(jī)制，并制定防制對(duì)策提供理論依據(jù)。 方法選取健康狀況良好，體重16~20g的雌性BALB/c小鼠飼養(yǎng)于清潔級(jí)動(dòng)物房，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后隨機(jī)分為空白對(duì)照組、溶劑對(duì)照組、2.5g/LTCE組和5.0g/LTCE組，TCE用終濃度不超過1%的DMSO溶解后經(jīng)飲水給予。分別在第2、4、8、12周摘眼球采集外周血，經(jīng)靜置分離上層血清凍存?zhèn)溆�，處死�?dòng)物后取肝臟組織凍存?zhèn)溆谩Ｓ萌詣?dòng)生化分析儀檢測(cè)肝臟生化指標(biāo)谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanineamiotransferase，ALT），取肝臟組織制作蘇木精—伊紅（(hematoxylin-eosin staining，HE）染色切片，顯微鏡下觀察評(píng)價(jià)肝臟病理改變，用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA）試劑盒檢測(cè)肝臟促炎細(xì)胞因子白介素（interleukin，IL）-1、IL-6和腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）-α含量；用熒光定量實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（real time-polymerase chain reactions，RT-PCR）法檢測(cè)肝臟PPARα、PPARβ和PPARγ mRNA表達(dá)情況，用免疫組織化學(xué)法對(duì)肝臟PPARα和PPARγ蛋白進(jìn)行定位。數(shù)據(jù)用Spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行錄入和分析。 結(jié)果 1一般情況：實(shí)驗(yàn)期間各時(shí)間段各組小鼠一般情況良好，未出現(xiàn)個(gè)體因TCE攝入而死亡的現(xiàn)象，各組小鼠平均飲水量和體重增長(zhǎng)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，各時(shí)間點(diǎn)小鼠肝臟系數(shù)組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 2飲水?dāng)z入TCE致小鼠肝損傷情況：在2、4周，2.5g/L和5.0g/L TCE組ALT水平較對(duì)照組有所升高（P 0.05，P 0.01），在8、12周，2.5g/L、5.0g/LTCE組ALT水平有所下降，但仍高于對(duì)照組，只有5.0g/l TCE組ALT水平在8周時(shí)顯著高于對(duì)照組（P 0.05，P 0.01）；組織病理學(xué)檢查進(jìn)一步顯示TCE染毒小鼠出現(xiàn)肝臟細(xì)胞水腫變性、炎細(xì)胞浸潤等不同程度的肝損傷改變，尤其是給予5.0g/L劑量在4周時(shí)損傷情況最為明顯；對(duì)肝臟促炎因子水平檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，2.5g/L和5.0g/LTCE組肝臟IL-1、IL-6、TNF-α水平均在4周時(shí)達(dá)到最高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05，P 0.01），在2、8周，5.0g/LTCE組小鼠肝臟IL-6、TNF-α水平與對(duì)照組比較也明顯升高（P 0.05，P 0.01），在12周時(shí)三種促炎細(xì)胞因子水平均有所下降，但仍高于對(duì)照組；相關(guān)性分析顯示血清ALT水平與肝臟促炎細(xì)胞因子水平IL-1，IL-6，TNF-α水平存在顯著的正相關(guān)（r=0.615，0.522，0.649，p 0.01）。 3肝臟PPARs表達(dá)情況：在4、8、12周，TCE暴露組PPARα mRNA水平顯著升高，且5.0g/LTCE組上升趨勢(shì)高于2.5g/LTCE組（P 0.05，P 0.01）；TCE暴露對(duì)PPARβ mRNA表達(dá)無顯著影響（P＞0.05）；在4周時(shí)，TCE暴露組PPARγmRNA水平也顯著上調(diào)（P 0.05），在8、12周，5.0g/L TCE組PPARγ mRNA水平高于對(duì)照組（P 0.05，P 0.01）。進(jìn)一步進(jìn)行免疫組化檢測(cè)顯示，PPARα和PPARγ在TCE染毒組小鼠肝臟組織細(xì)胞核中都有表達(dá)，且陽性細(xì)胞率均顯著高于對(duì)照組（P 0.05）。 結(jié)論 1經(jīng)飲水?dāng)z入TCE可致小鼠肝損傷，肝功能指標(biāo)ALT及肝臟中促炎細(xì)胞因子IL-1，IL-6，TNF-α含量升高，并見明顯炎細(xì)胞浸潤，部分肝細(xì)胞輕度水腫，少許細(xì)胞變性或壞死。 2經(jīng)飲水?dāng)z入TCE對(duì)小鼠肝臟PPARα和PPARγ表達(dá)有顯著影響，可顯著上調(diào)其mRNA表達(dá)水平，同時(shí)激活其蛋白表達(dá)。 3TCE飲水?dāng)z入導(dǎo)致的PPARα和PPARγ表達(dá)上調(diào)可能與小鼠肝臟損傷有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：三氯乙烯 肝臟損傷 PPARα PPARγ
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R114
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-7
• 中文摘要7-10
• Abstract10-13
• 1 引言13-15
• 2 材料與方法15-23
• 3 結(jié)果23-38
• 4 討論38-42
• 5 結(jié)論42
• 6 參考文獻(xiàn)42-48
• 附錄48-49
• 致謝49-50
• 綜述50-60
• 參考文獻(xiàn)56-60

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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本文編號(hào)：1131365