本文關(guān)鍵詞：食品源性雙酚A暴露對腦發(fā)育和功能的影響及機理研究

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【摘要】：雙酚A (Bisphenol-A, BPA)是一種廣泛存在的環(huán)境雌激素干擾劑,并兼有擬雌激素、抗雌激素和抗雄激素活性。它既可以與雌激素受體結(jié)合,也可以與膜表面的非雌激素受體結(jié)合,從而干擾正常的生理活動。由于內(nèi)源性激素對腦發(fā)育及功能都十分重要,因此雙酚A被認(rèn)為可影響腦發(fā)育及腦功能,進而影響人及動物的相關(guān)行為。但雙酚A影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)的具體分子機制目前尚不是很清楚,甚至存在一些爭議。目的探究發(fā)育期雙酚A暴露對SD鼠海馬CAl及DG區(qū)樹突棘形態(tài)的影響,并從Wnt信號通路的角度闡述可能的分子機制；探究慢性雙酚A暴露對成年鼠自主行為及空間記憶的影響,并研究了這種影響是否與多巴胺系統(tǒng)及組蛋白的表觀遺傳修飾有關(guān)。方法1.從整體動物及培養(yǎng)的離體海馬神經(jīng)元兩方面研究了發(fā)育期雙酚A暴露對海馬樹突棘的影響。整體動物雙酚A暴露劑量為50μg/kg/d、250μg/kg/d、 500μg/kg/d,暴露時間為SD鼠出生7-14天,暴露方式為腹腔注射。離體海馬神經(jīng)元雙酚A暴露劑量10nM、100nM、1μm、10μm,暴露時間是細(xì)胞培養(yǎng)至第14天雙酚A暴露2小時。Golgi-cox染色觀察在體海馬神經(jīng)細(xì)胞的樹突棘形態(tài),慢病毒轉(zhuǎn)染EGFP.激光共聚焦顯微鏡拍攝觀察離體海馬神經(jīng)元的樹突棘形態(tài)。Western blot檢測Wnt蛋白的表達量。2.雙酚A慢性暴露實驗：子鼠自母鼠懷孕開始接受BPA暴露一直到成年,在其第8周進行曠場試驗,12周時進行水迷宮實驗,Golgi-cox染色觀察雙酚A暴露后海馬神經(jīng)細(xì)胞的樹突棘形態(tài),Western blot檢測多巴胺系統(tǒng)相關(guān)蛋白及組蛋白、乙�；慕M蛋白的表達量,PCR檢測相關(guān)蛋白基因的表達。結(jié)果1.整體動物及離體海馬神經(jīng)元發(fā)育期BPA暴露會顯著降低海馬CA1及DG區(qū)樹突棘密度,Wnt7a表達下降,Wnt5a表達上升,β-catenin磷酸化程度升高。外源性Wnt7a細(xì)胞因子可修復(fù)雙酚A造成的樹突棘損傷,并降低β-catenin磷酸化程度。2.雙酚A慢性暴露導(dǎo)致SD雄鼠出現(xiàn)多動行為,損傷SD雄鼠及雌鼠的空間記憶,降低海馬CA1區(qū)的樹突棘密度。雙酚A暴露使多巴胺轉(zhuǎn)運體DAT1及多巴胺受體DRD4蛋白及mRNA水平都顯著下降,高劑量組(50mg/L)組蛋白H3的乙�；潭让黠@升高,進一步的研究表明,高劑量組去乙�；窰DAC1明顯降低從而使組蛋白乙�；潭忍岣�。結(jié)論1.發(fā)育期雙酚A暴露可損傷海馬CA1及DG區(qū)樹突棘形成,導(dǎo)致樹突棘密度降低。Wnt信號通路可能參與了BPA致樹突棘損傷這一過程。其中,BPA可能通過靶點Wnt7a損傷樹突棘生長并能降低β-catenin的穩(wěn)定性。2.慢性雙酚A暴露損傷SD鼠的空間記憶,并伴有樹突棘密度的下降。BPA引起多動與劑量有關(guān)：低劑量雙酚A暴露可致雄鼠出現(xiàn)多動現(xiàn)象,但高劑量BPA暴露雄鼠并不出現(xiàn)多動。原因可能是高劑量BPA引起大鼠組蛋白乙�；缴�。進一步的研究發(fā)現(xiàn),雙酚A暴露使多巴胺受體DRD4及多巴胺轉(zhuǎn)運體DAT1受到抑制,多巴胺系統(tǒng)與多動的關(guān)系尚需進一步的研究證明。
【關(guān)鍵詞】：雙酚A Wnt信號通路 表觀遺傳 多巴胺 樹突棘密度
【學(xué)位授予單位】：合肥工業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R114
【目錄】：

• 致謝7-8
• 摘要8-10
• ABSTRACT10-17
• 第一章 緒論17-26
• 1.1 BPA暴露來源17-19
• 1.1.1 食物17-18
• 1.1.2 水體18
• 1.1.3 空氣18-19
• 1.1.4 土壤及沉積物19
• 1.2 雙酚A檢測19
• 1.2.1 物理法19
• 1.2.2 免疫分析法19
• 1.2.3 化學(xué)分析法19
• 1.3 雙酚A暴露對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的影響19-21
• 1.3.1 雙酚A對腦形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響19-20
• 1.3.2 雙酚A對神經(jīng)遞質(zhì)的影響20-21
• 1.4 雙酚A對行為的影響21
• 1.4.1 生殖行為21
• 1.4.2 非生殖行為21
• 1.5 BPA作用機制21-26
• 1.5.1 通過與受體結(jié)合發(fā)揮作用21-22
• 1.5.2 干擾與受體無關(guān)的細(xì)胞信號通路22-24
• 1.5.3 課題研究的背景和意義24
• 1.5.4 課題研究的主要內(nèi)容24
• 1.5.5 技術(shù)路線圖24-26
• 第二章 發(fā)育期雙酚A暴露對SD鼠海馬區(qū)樹突棘形態(tài)的影響及機理的在體研究26-36
• 2.1 材料與方法26-29
• 2.1.1 主要儀器26
• 2.1.2 主要試劑和藥品26
• 2.1.3 主要抗體26
• 2.1.4 實驗動物26
• 2.1.5 Golgi-cox染色26-27
• 2.1.6 Western blot蛋白定量27-29
• 2.1.7 數(shù)據(jù)分析29
• 2.2 實驗結(jié)果29-34
• 2.2.1 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬DG區(qū)樹突棘形態(tài)的影響29-31
• 2.2.2 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬CA1區(qū)樹突棘形態(tài)的影響31-32
• 2.2.3 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬CA1及DG區(qū)Wnt7a的影響32
• 2.2.4 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬CA1及DG區(qū)Wnt5a的影響32-33
• 2.2.5 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬CA1及DG區(qū)β-catenin穩(wěn)定性的影響33-34
• 2.3 討論34-36
• 第三章 發(fā)育期雙酚A暴露對海馬神經(jīng)元樹突棘形態(tài)的影響及機理的離體研究36-42
• 3.1 材料與方法36-38
• 3.1.1 主要儀器36
• 3.1.2 主要試劑和藥品36
• 3.1.3 海馬神經(jīng)元細(xì)胞培養(yǎng)36
• 3.1.4 慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元36-37
• 3.1.5 蛋白收集37
• 3.1.6 激光共聚焦顯微鏡成像方法37
• 3.1.7 Western blot蛋白定量37
• 3.1.8 數(shù)據(jù)分析37-38
• 3.2 實驗結(jié)果38-41
• 3.2.1 雙酚A暴露對離體海馬神經(jīng)元樹突棘密度的影響38
• 3.2.2 雙酚A對離體神經(jīng)元中Wnt通路相關(guān)蛋白的影響38-39
• 3.2.3 外源性Wnt7a細(xì)胞因子對雙酚A造成的樹突棘損傷的修復(fù)作用39-41
• 3.3 討論41-42
• 第四章 雙酚A慢性暴露對SD鼠行為的影響及機理研究42-58
• 4.1 材料與方法42-47
• 4.1.1 主要儀器42
• 4.1.2 主要試劑和藥品42
• 4.1.3 動物造模42
• 4.1.4 曠場試驗42-43
• 4.1.5 水迷宮實驗43
• 4.1.6 DRD4/DAT1/HDAC1/P300等基因表達水平的檢測43-46
• 4.1.7 Western blot蛋白定量46-47
• 4.1.8 數(shù)據(jù)分析47
• 4.2 實驗結(jié)果47-55
• 4.2.1 雙酚A暴露對SD鼠曠場行為的影響47-48
• 4.2.2 雙酚A暴露對SD鼠空間記憶的影響48-50
• 4.2.3 雙酚A暴露對海馬CA1區(qū)神經(jīng)元樹突棘密度的影響50-51
• 4.2.4 海馬組織蛋白濃度的測定51-52
• 4.2.5 雙酚A暴露對多巴胺轉(zhuǎn)運體(DAT1)及多巴胺受體(DRD4)蛋白表達水平的影響52-54
• 4.2.6 高劑量雙酚A暴露導(dǎo)致組蛋白H3乙�；降挠绊�54
• 4.2.7 雙酚A暴露對調(diào)控組蛋白乙�；降膬煞N酶HDAC1及P300的影響54-55
• 4.3 討論55-58
• 參考文獻58-66
• 碩士期間的學(xué)術(shù)活動及研究成果66

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