本文關(guān)鍵詞：STGC3基因表達下調(diào)對NP69細胞系蛋白質(zhì)表達譜的影響

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【摘要】：目的：運用RNAi技術(shù)，敲低NP69細胞系中STGC3基因的表達；采用iTRAQ同位素標記及質(zhì)譜分析，研究STGC3基因表達下調(diào)對NP69細胞系蛋白質(zhì)表達譜的影響，篩選差異表達蛋白質(zhì)分子，探討STGC3基因調(diào)控的相關(guān)分子網(wǎng)絡(luò)，為闡明鼻咽癌發(fā)病的分子機制提供強有力的實驗依據(jù)。 方法：參照RNAi的設(shè)計原則，設(shè)計靶向干擾STGC3基因表的發(fā)夾樣序列（shorthairoin RNAs, shRNA），構(gòu)建pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3真核表達載體，并對重組質(zhì)粒進行測序及比對分析；隨后將重組質(zhì)粒用LPTM2000轉(zhuǎn)染NP69細胞，經(jīng)G418篩選，建立穩(wěn)定低表達STGC3的pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細胞系；采用RT-PCR驗證pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、 pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三組細胞STGC3基因的mRNA表達水平；分別提取pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69、pRNAi-U6.1/scramble/STGC3/NP69及NP69三組細胞的總蛋白，進行蛋白酶解，iTRAQ同位素標記，高效液相色譜儀分離，四級桿 靜電場軌道阱質(zhì)譜儀進行質(zhì)譜分析，獲取蛋白質(zhì)表達豐度信息，對所獲取蛋白質(zhì)表達信息進行數(shù)據(jù)庫搜索分析，篩選差異表達蛋白質(zhì)分子；運用生物信息學(xué)方法，分析差異蛋白質(zhì)的相互作用。 結(jié)果：經(jīng)測序及Blast比對，證實pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重組質(zhì)粒構(gòu)建成功；通過熒光顯微鏡觀察，轉(zhuǎn)染pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3和pRNAi-U6.1/scramble/STGC3重組質(zhì)粒的NP69細胞可見GFP表達，表明重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染成功；RT-PCR結(jié)果顯示，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3導(dǎo)入NP69細胞，可有效降低STGC3基因的表達，pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細胞系成功建立；iTRAQ同位素標記及質(zhì)譜技術(shù)，，分析pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細胞蛋白質(zhì)表達譜的變化，共鑒定出83個差異表達蛋白，其中上調(diào)蛋白45個，下調(diào)蛋白38個。生物信息學(xué)分析結(jié)果表明，這些差異蛋白質(zhì)分子與蛋白質(zhì)合成、細胞生長增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等功能相關(guān)，并初步構(gòu)建了蛋白質(zhì)的相互作用網(wǎng)絡(luò)圖。 結(jié)論： 1．成功建立pRNAi-U6.1/shRNA/STGC3/NP69細胞系。 2．STGC3基因在NP69細胞的表達降低，可導(dǎo)致NP69細胞的蛋白質(zhì)表達譜發(fā)生改變，本實驗鑒定出83個差異蛋白質(zhì)分子，其中上調(diào)蛋白質(zhì)45個，下調(diào)蛋白質(zhì)38個，其功能涉及蛋白質(zhì)合成、細胞生長增殖、凋亡及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等。
【關(guān)鍵詞】：STGC3 鼻咽癌 NP69細胞系 iTRAQ 質(zhì)譜
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 技術(shù)路線11-12
• 材料與方法12-22
• 實驗結(jié)果22-42
• 討論42-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻51-60
• 附錄一60-62
• 附錄二62-63
• 綜述63-73
• 參考文獻69-73
• 在讀期間發(fā)表的論文與參與課題73-74
• 致謝74

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前7條

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本文編號：917042