本文關(guān)鍵詞：PAX3對(duì)靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討配對(duì)盒基因(pair box 3,PAX3)突變對(duì)小眼球畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)基因轉(zhuǎn)錄活性的影響及其在I型Waardenburg綜合征(Waardenburg syndrome,WS)發(fā)病中的作用。方法野生型PAX3及其致病突變H80D和H186fsX5表達(dá)質(zhì)粒瞬時(shí)轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,應(yīng)用熒光素酶活性檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)MITF報(bào)告基因活性檢測(cè),觀察野生/突變PAX3蛋白對(duì)其靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性的調(diào)控作用及二個(gè)突變蛋白對(duì)野生PAX3蛋白功能的影響;應(yīng)用生物素標(biāo)記的含序列attaat的DNA寡核苷酸鏈探針?lè)謩e沉淀PAX3、H80D和H186fsX5蛋白,檢測(cè)野生/突變PAX3蛋白與靶基因MITF啟動(dòng)子的結(jié)合力。結(jié)果盡管H80D蛋白仍殘余部分功能可增加MITF啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性,但與野生PAX3蛋白相比,二者差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01),而H186fsX5蛋白則完全失去調(diào)控MITF啟動(dòng)子轉(zhuǎn)錄活性作用(P0.01);二者均未對(duì)野生PAX3蛋白功能產(chǎn)生顯性負(fù)效應(yīng)作用(P0.05)。突變H80D蛋白與野生PAX3蛋白均可與MITF啟動(dòng)子特異DNA序列attaat結(jié)合,而突變H186fsX5蛋白則不能與之結(jié)合。結(jié)論 H80D和H186fsX5影響靶基因MITF轉(zhuǎn)錄活性,使其表達(dá)下調(diào)、黑色素合成減少,以單倍體劑量不足效應(yīng)致I型WS。
【作者單位】： 上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬仁濟(jì)醫(yī)院耳鼻咽喉科;新疆醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻咽喉科;新疆昌吉州中醫(yī)醫(yī)院耳鼻咽喉科;中南大學(xué)湘雅醫(yī)院耳鼻咽喉科;
【關(guān)鍵詞】： Waardenburg綜合征 配對(duì)盒基因 基因突變 小眼球畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81260160)資助
【分類(lèi)號(hào)】：R77
【正文快照】： 配對(duì)盒基因(pair　box　3,PAX3)在脊椎動(dòng)物高司;DMEM、FBS、Pen　Strep、Opti-MEM、胰酶購(gòu)度保守,是神經(jīng)嵴(neural　crest,NC)發(fā)育的主要調(diào)自美國(guó)Gibco公司;Protease　inhibitor　cocktail、單控因子之一,NC是由起源于背神經(jīng)管的多潛能細(xì)克隆鼠抗Flag抗體、TWEEN-20、辣根過(guò)氧

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【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：836404