本文關(guān)鍵詞：抑制FGF信號通路對橢圓囊毛細(xì)胞再生的調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 橢圓囊 Atoh1/Math1基因 FGF信號通路 毛細(xì)胞 毛細(xì)胞再生 慶大霉素 細(xì)胞增殖 平面細(xì)胞極性(PCP) 纖毛

【摘要】：目的慶大霉素等氨基糖苷類藥物對內(nèi)耳的毒性作用可通過破壞毛細(xì)胞而引起的聽力和平衡功能受損表現(xiàn)出來。但慶大霉素對橢圓囊感覺上皮的破壞程度和抑制FGF信號通路對過表達(dá)Atoh1/Math1基因引起毛細(xì)胞再生的調(diào)控作用仍有待詳細(xì)論述。本研究擬解決問題：1.利用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法對慶大霉素處理小鼠橢圓囊不同時(shí)間段引起的微紋區(qū)和非微紋區(qū)毛細(xì)胞損傷程度和細(xì)胞增殖程度進(jìn)行研究；2.抑制FGF信號通路對Ad-Math1誘導(dǎo)小鼠橢圓囊感覺上皮區(qū)域與非感覺上皮區(qū)域內(nèi)細(xì)胞增殖和毛細(xì)胞樣細(xì)胞產(chǎn)生的調(diào)控作用；3. Ad-Math1誘導(dǎo)產(chǎn)生的新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞是否具有細(xì)胞平面極性及其調(diào)控機(jī)制研究。 方法本研究使用慶大霉素建立體外培養(yǎng)橢圓囊毛細(xì)胞的損傷模型。于不同時(shí)間段觀察慶大霉素對橢圓囊微紋區(qū)和非微紋區(qū)內(nèi)Phalloidin標(biāo)記的毛細(xì)胞纖毛和毛細(xì)胞特異性抗體MyosinⅦa陽性細(xì)胞的破壞程度；以及通過增殖細(xì)胞EdU特異性染色觀察感覺上皮和非感覺上皮的細(xì)胞增殖情況。之后,利用激光共聚焦和SPSS軟件從形態(tài)學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)角度驗(yàn)證和分析慶大霉素對毛細(xì)胞的破壞和細(xì)胞增殖的作用。通過含有Atoh1/Mathl基因的腺病毒載體(Ad-Math1)轉(zhuǎn)染小鼠體外培養(yǎng)橢圓囊組織以促進(jìn)毛細(xì)胞樣細(xì)胞產(chǎn)生。對轉(zhuǎn)病毒后不同時(shí)間點(diǎn)標(biāo)本進(jìn)行固定和免疫組織化學(xué)染色,驗(yàn)證過表達(dá)Atohl/Math1基因?qū)Ω杏X上皮和非感覺上皮細(xì)胞增殖情況、新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞產(chǎn)生數(shù)量和規(guī)律的影響。與此同時(shí),FGF信號通路阻滯劑與加入Ad-Math1和／或慶大霉素的橢圓囊組織共培養(yǎng),觀察其對新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞的調(diào)控作用。最后應(yīng)用觀察細(xì)胞平面極性的抗體Spectrin、γ-tubulin對Ad-Math1轉(zhuǎn)染的橢圓囊標(biāo)本進(jìn)行免疫熒光染色,觀察新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞的細(xì)胞平面極性規(guī)律。 結(jié)果通過免疫熒光染色的形態(tài)學(xué)和SPSS的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法研究表明,體外培養(yǎng)新生小鼠前庭橢圓囊在慶大霉素處理后最早出現(xiàn)毛細(xì)胞纖毛損傷,以微紋區(qū)較明顯；毛細(xì)胞特異性標(biāo)記物MyosinⅦa陽性的細(xì)胞隨著時(shí)間的延長逐漸減少；標(biāo)記毛細(xì)胞前體細(xì)胞的Sox2陽性細(xì)胞在微紋區(qū)中隨著時(shí)間的延長逐漸增多。同時(shí),橢圓囊感覺上皮區(qū)域在慶大霉素處理后增殖細(xì)胞較對照組明顯增多,但隨著用藥劑量的增加,增殖細(xì)胞逐漸減少。Ad-Math1和慶大霉素共同作用橢圓囊組織后,感覺上皮區(qū)域細(xì)胞增殖較單純加入慶大霉素或Ad-Math1組多,且主要位于微紋區(qū)。當(dāng)同時(shí)加入FGF阻滯劑SU5402時(shí),增殖細(xì)胞無明顯增多,但感覺區(qū)域與非感覺區(qū)域毛細(xì)胞特異性標(biāo)記物MyosinⅦa陽性細(xì)胞,即新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞較單純加入Ad-Math1組增多。新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞動(dòng)纖毛從細(xì)胞表面中央逐漸移向一側(cè),且標(biāo)記毛細(xì)胞纖毛極性的特異性標(biāo)記物Spectrin和γ-tubulin染色顯示感覺上皮區(qū)域新生的毛細(xì)胞樣細(xì)胞與原位存在的毛細(xì)胞平面極性方向一致,即纖毛延極性分界線相對排列。而非感覺上皮區(qū)域新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞極性紊亂。 結(jié)論慶大霉素處理體外培養(yǎng)小鼠橢圓囊可導(dǎo)致毛細(xì)胞的損傷,并伴有感覺上皮和非感覺上皮細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。當(dāng)過量表達(dá)Atoh1/Math1基因可促使橢圓囊感覺上皮和非感覺上皮區(qū)域細(xì)胞轉(zhuǎn)化為毛細(xì)胞樣細(xì)胞。抑制FGF信號通路可促進(jìn)Ad-Math1介導(dǎo)的橢圓囊組織新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞數(shù)量增多,卻對細(xì)胞增殖無明顯調(diào)控作用。新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞纖毛形成規(guī)律類似胚胎期纖毛形成規(guī)律,且感覺上皮區(qū)域新生的毛細(xì)胞樣細(xì)胞與原位存在的毛細(xì)胞平面極性方向一致,而非感覺上皮區(qū)域新生毛細(xì)胞樣細(xì)胞無統(tǒng)一極性。
【關(guān)鍵詞】：橢圓囊 Atoh1/Math1基因 FGF信號通路 毛細(xì)胞 毛細(xì)胞再生 慶大霉素 細(xì)胞增殖 平面細(xì)胞極性(PCP) 纖毛
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R764
【目錄】：

• 縮略詞表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-22
• References16-22
• 第一章 慶大霉素對橢圓囊毛細(xì)胞損傷模型的建立22-42
• 前言22-25
• References23-25
• 材料方法25-30
• 結(jié)果與附圖30-37
• 結(jié)論37-38
• 討論38-40
• References40-42
• 第二章 抑制FGF信號通路對Ad-Math1介導(dǎo)橢圓囊毛細(xì)胞再生數(shù)量的調(diào)控42-65
• 前言42-45
• References44-45
• 材料方法45-49
• 結(jié)果與附圖49-61
• 結(jié)果61-62
• 討論62-64
• References64-65
• 第三章 橢圓囊再生毛細(xì)胞極性的特點(diǎn)65-79
• 前言65-67
• Reference66-67
• 材料與方法67-71
• 結(jié)果與附圖71-76
• 結(jié)果76-77
• 討論77-78
• References78-79
• 全文小結(jié)79-80
• 本文創(chuàng)新性80-81
• 致謝81-82
• 已發(fā)表和在投文章82-83

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 Zenner H P;汪吉寶;;毛細(xì)胞的主動(dòng)運(yùn)動(dòng):聽覺生理中的新理論[J];國外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊;1986年06期

2 王太民;伸偉綱;張里仁;;聽信息在毛細(xì)胞中的轉(zhuǎn)導(dǎo)過程及模型[J];醫(yī)學(xué)物理;1989年04期

3 董明敏，婁衛(wèi)華，董民聲;慶大霉素中毒后小雞耳蝸毛細(xì)胞的再生研究[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1995年03期

4 施寧華,張志堅(jiān),許燕,王卉放,戴樹宏;神經(jīng)生長因子對大鼠全腦缺血再灌后內(nèi)耳遲發(fā)性毛細(xì)胞死亡和聽力損傷的影響[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年05期

5 李勝利;趙謙;任田英;張少強(qiáng);閆利英;劉思偉;王婉瑩;朱宏亮;;回聲定位蝙蝠耳蝸聽黃斑區(qū)毛細(xì)胞形態(tài)研究[J];聽力學(xué)及言語疾病雜志;2011年03期

6 吳銘權(quán),宋學(xué)政,曾一同;掃描電鏡測定豚鼠耳蝸基底膜長度與毛細(xì)胞寬度等正常值的方法[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;1987年01期

7 楊志華,蘇鴻禧;277毛細(xì)胞再生研究的有關(guān)進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué).耳鼻咽喉科學(xué)分冊;1991年04期

8 沙建慧,李云義,李云閣,劉煥珠,楊中萬,鐘國贛,戰(zhàn)術(shù);豚鼠球囊毛細(xì)胞的鉀離子流[J];航空軍醫(yī);1999年05期

9 楊美琴;遲放魯;高文元;;促毛細(xì)胞再生激發(fā)因素的研究進(jìn)展[J];中國眼耳鼻喉科雜志;2007年02期

10 楊衛(wèi)平;;絲狀肌動(dòng)蛋白在噪聲致耳蝸不同階段凋亡壞死毛細(xì)胞中的變化[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2010年13期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李淑榮;趙玉珍;張連巍;雷建章;;豚鼠內(nèi)耳螺旋器毛細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)特征[A];第十二屆全國電子顯微學(xué)會(huì)議論文集[C];2002年

2 于棟禎;;硫酸鏈霉素對體外培養(yǎng)前庭毛細(xì)胞的損害作用[A];華東六省一市耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2008年浙江省耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

3 李勝利;朱宏亮;劉全征;;純中藥制劑復(fù)聰湯對工業(yè)噪聲致聾豚鼠耳蝸毛細(xì)胞修復(fù)再生的實(shí)驗(yàn)研究[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 朱云;陶永;孔維佳;;m1-m4膽堿能受體抑制劑對豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的影響[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

5 宇雅蘋;楊仕明;鄧安春;郭維維;胡吟燕;孫建和;;用MyosinⅥ標(biāo)記毛細(xì)胞研究小鼠內(nèi)耳發(fā)育過程[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十次全國耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編（上）[C];2007年

6 彭婭婷;慈軍;方英;;耳蝸中三磷酸腺苷的來源及其釋放機(jī)制[A];2012年浙江省耳鼻咽喉科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2012年

7 李淑榮;趙玉珍;張連巍;雷建章;;透射電鏡對豚鼠內(nèi)耳螺旋器毛細(xì)胞的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會(huì)2002年年會(huì)文摘匯編[C];2002年

8 韓朝;;Ad5-math1/egfp在成年豚鼠內(nèi)耳誘導(dǎo)產(chǎn)生新生細(xì)胞[A];華東六省一市耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)會(huì)議暨2008年浙江省耳鼻咽喉-頭頸外科學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2008年

9 林勤;李文妍;陳巖;孫珊;李華偉;;干擾Rb-Raf-1抑制斑馬魚神經(jīng)丘毛細(xì)胞再生[A];全國耳鼻咽喉頭頸外科中青年學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

10 孫建和;胡吟燕;翟所強(qiáng);李興啟;;數(shù)字化人體結(jié)構(gòu)研究進(jìn)展和應(yīng)用[A];第十一屆中國體視學(xué)與圖像分析學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 記者 常麗君;科學(xué)家再生感音毛細(xì)胞恢復(fù)小鼠聽力[N];科技日報(bào);2013年

2 馮衛(wèi)東;我能讓你聽得更清楚[N];科技日報(bào);2007年

3 曲人;日京都大學(xué)成功再生內(nèi)耳毛細(xì)胞[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

4 ;先天性耳聾治療新思路[N];中國醫(yī)藥報(bào);2003年

5 王小溪;小動(dòng)作可防電腦傷害[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

6 ;7種小分子可影響聽力[N];新華每日電訊;2009年

7 北京同仁醫(yī)院耳鼻咽喉科副主任醫(yī)師 夏寅;保護(hù)聽力打手機(jī)一次別超10分鐘[N];北京日報(bào);2008年

8 韓振奎;小心，暴怒會(huì)引發(fā)耳聾[N];中國保險(xiǎn)報(bào);2003年

9 記者　田學(xué)科;人體聽覺結(jié)構(gòu)獲得新解析[N];科技日報(bào);2007年

10 劉江峰;奧運(yùn)精彩考問聽力[N];衛(wèi)生與生活報(bào);2008年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 袁偉;腺病毒介導(dǎo)的A20基因?qū)Χ伱?xì)胞保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2008年

2 于慧前;逆轉(zhuǎn)H3K9me2保護(hù)耳蝸毛細(xì)胞的基礎(chǔ)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 舒易來;腺相關(guān)及腺病毒內(nèi)耳基因轉(zhuǎn)染和Rb敲除結(jié)合ISL1表達(dá)誘導(dǎo)小鼠毛細(xì)胞與支持細(xì)胞增殖[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

4 張賢芬;卡那霉素和速尿?qū)е码嗍蠖@及其基因治療的探索性研究[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2008年

5 朱云;豚鼠Ⅰ型前庭毛細(xì)胞膽堿能受體特性的研究[D];華中科技大學(xué);2008年

6 林順漲;小鼠胚胎耳蝸輻射損傷后毛細(xì)胞再生及其機(jī)理的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);1997年

7 王懿;豚鼠Ⅱ型前庭毛細(xì)胞M型膽堿能受體介導(dǎo)的膽堿能抑制機(jī)制的研究[D];華中科技大學(xué);2012年

8 李葳;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù)研究[D];中南大學(xué);2013年

9 劉少峰;小鼠聽覺上皮發(fā)育及其相關(guān)分子機(jī)制[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 倪月秋;川芎嗪注射液對豚鼠慶大霉素耳毒性保護(hù)作用和促進(jìn)再生修復(fù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2002年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳凈華;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化成聽毛細(xì)胞祖細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

2 李麗賢;γ-分泌酶抑制劑（DAPT）與Math1基因?qū)﹄x體培養(yǎng)大鼠耳蝸毛細(xì)胞發(fā)育的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 舒衛(wèi)寧;Math1基因?qū)π律笫蠡啄p傷后的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2010年

4 田媛;一氧化氮合酶抑制劑和鈣蛋白酶抑制劑對慶大霉素所致耳蝸毛細(xì)胞損傷協(xié)同防護(hù)作用的觀察[D];中國醫(yī)科大學(xué);2004年

5 楊文飛;共培養(yǎng)法誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向毛細(xì)胞樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

6 劉曉薇;豚鼠神經(jīng)干細(xì)胞體外分化毛細(xì)胞樣細(xì)胞及耳蝸移植的實(shí)驗(yàn)研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2008年

7 鄭貴亮;脂質(zhì)體介導(dǎo)的bFGF-Math1基因在UEC-4細(xì)胞中的表達(dá)及誘導(dǎo)分化作用[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2005年

8 薛楨;小鼠聽覺腦干誘發(fā)電位的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 馬靜;慶大霉素對耳蝸毛細(xì)胞和傳出神經(jīng)損害定量分析[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2005年

10 馬銳;抑制FGF信號通路對橢圓囊毛細(xì)胞再生的調(diào)控研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

，

本文編號：670972