本文關鍵詞：視網膜色素變性家系SAG基因新致病突變的鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：視網膜色素變性(Retinitis pigmentosa, RP)是視網膜光感受器細胞退行性變導致的一組眼底疾病,是世界范圍內失明的主要原因之一。該病屬于單基因遺傳病,具有明顯的遺傳異質性,致病基因眾多,同一基因致病突變多。已經鑒定的非綜合征型RP致病基因僅能解釋約60%RP患者的遺傳病因。找到更多的RP致病基因,闡明基因型與表型的關系以及其致病機制,為臨床分子診斷和基因治療奠定基礎,從而提高患者的生活質量具有重要意義。本課題以一個視網膜色素變性家系為研究對象,旨在找到該家系的致病基因,并進一步闡明基因型和表型的關系,為研究疾病的發(fā)病機制奠定基礎。方法：首先收集到一個視網膜色素變性家系和對照樣本,詳細了解家系成員的信息,繪制家系圖,然后對家系成員進行詳細的問診和眼科檢查,明確診斷,留取血液樣本,提取基因組DNA。接著對先證者進行全外顯子測序,測序完成后運用BWA軟件將原始數據與UCSC hgl9參考序列進行比對、篩選數據并評估測序結果,然后用SAMTools軟件檢測并注釋變異數據,并用SIFT等軟件預測突變功能,最后用dbSNP和1000G數據庫篩除變異數據里的已知變異后得到候選基因位點。然后用Sang er測序的方法在家系中對過濾出的基因位點進行驗證,鑒定基因型與表型共分離的基因,并在家系外的正常對照樣本中進一步驗證。分析目的基因的生物信息學信息,應用免疫熒光技術檢測目的基因在小鼠視網膜組織的表達及定位。構建攜帶目的基因野生型及突變型的真核表達載體,通過Western blot檢測野生型和突變型基因編碼蛋白在293T細胞內是否有表達。熒光共聚焦顯微鏡觀察野生型及突變型基因編碼蛋白在cos7細胞內表達及定位是否存在差異。結果：該視網膜色素變性家系為常染色體顯性遺傳。對先證者(Ⅲ-14)進行全外顯子測序,經過將全外顯子測序的數據進行過濾分析后篩選出27個可能的致病基因位點。用Sanger測序在家系中及家系外對這27個基因位點進行驗證,僅SAG基因上的雜合突變c.257AG (p.D86G)在該家系中與疾病表型呈現共分離,并且在對照樣本中未發(fā)現該突變存在。生物信息學分析顯示該突變位點位于序列保守區(qū)域、突變功能預測提示為有害突變(Damaging)。SAG基因是光感受器細胞退行性變特異基因,主要在視網膜組織視桿細胞內表達。我們成功構建了攜帶SAG基因野生型和突變型的真核表達載體,Western blot檢測到突變型和野生型在293T細胞內均有表達。熒光共聚焦顯微鏡觀察到SAG基因野生型和突變型在cos7細胞內表達位置存在差異。結論：1.SAG基因上的雜合突變c.257AG (p.D86G)可能是視網膜色素變性家系的致病突變。2.SAG野生型和突變型基因在體外培養(yǎng)的細胞表達存在差異,可能是突變型SAG基因致病的原因。
【關鍵詞】：視網膜色素變性 全外顯子測序 SAG基因
【學位授予單位】：四川醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R774.1
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• 英文摘要5-8
• 前言8-12
• 材料與方法12-33
• 結果33-42
• 討論42-46
• 結論46-47
• 參考文獻47-53
• 英漢縮略詞對照表53-55
• 致謝55-56
• 綜述56-72
• 參考文獻68-72

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