目的:眼部新生血管疾病包括增殖性糖尿病視網(wǎng)膜病變(PDR)、濕性年齡相關(guān)性黃斑變性(AMD)、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病變(ROP),此類疾病在發(fā)達(dá)國(guó)家已經(jīng)成為從嬰幼兒到老年人各個(gè)年齡階段致盲和視力障礙的最主要原因,在中國(guó)亦是嚴(yán)重致盲性眼病之一,嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。目前對(duì)于此類疾病的臨床治療包括都存在損傷組織、容易復(fù)發(fā)的特點(diǎn),使此類疾病致盲的人群仍然不斷擴(kuò)大。因此研究基于控制新生血管發(fā)生發(fā)展的新型治療模式十分必要。新生血管生成是一個(gè)多因素參與的復(fù)雜病理過程,以VEGF為代表的多種生長(zhǎng)因子在其發(fā)生發(fā)展過程中起作用。HGF是一種內(nèi)皮特異性生長(zhǎng)因子,與視網(wǎng)膜血管內(nèi)皮細(xì)胞的酪氨酸激酶受體c-met結(jié)合刺激其增殖及遷移。最新研究發(fā)現(xiàn)PDR患者的血清與玻璃體中HGF的濃度顯著升高,同時(shí)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HGF具有較強(qiáng)的促視網(wǎng)膜內(nèi)皮細(xì)胞有絲分裂活性,提示HGF通路是視網(wǎng)膜新生血管生成的重要中間途徑之一。而HGF的一些結(jié)構(gòu)域分子具有抗血管生成活性,如HGF的α鏈包含4個(gè)Kringle結(jié)構(gòu)域和氨基末端發(fā)夾結(jié)構(gòu)域(NK4)具有抗VEGF誘導(dǎo)的新生血管生成作用,Kringle1-4,N末端結(jié)構(gòu)域及Kringle1也同樣...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略語
緒論
第一部分：rAAV-HGFK1對(duì)牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響
    1 前言
    2 材料與方法
        2.1 主要材料和試劑
        2.2 主要儀器
        2.3 牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的培養(yǎng)
        2.4 牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的鑒定
        2.5 rAAV-HGFK1對(duì)牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖的影響
        2.6 rAAV-HGFK1對(duì)牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的影響
        2.7 免疫印跡分析(Western blot)
            2.7.1 蛋白樣品的制備
            2.7.2 操作過程
        2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
    3 結(jié)果
        3.1 牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的原代培養(yǎng)
        3.2 牛視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞的傳代培養(yǎng)
        3.3 BREC的鑒定
        3.4 rAAV-HGFK1對(duì)BREC體外增殖的影響
        3.5 rAAV-HGFK1對(duì)BREC凋亡的影響
        3.6 rAAV-HGFK1通過MAPK途徑調(diào)節(jié)BREC
    4 討論
第二部分：低氧誘導(dǎo)的小鼠視網(wǎng)膜病變模型的建立及觀察
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要材料和試劑
        2.2 主要儀器和設(shè)備
        2.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.4 OIR小鼠模型的建立
        2.5 rAAV-HGFK1感染小鼠視網(wǎng)膜的檢測(cè)
        2.6 視網(wǎng)膜新生血管增殖病變鑒定及定量分析
        2.7 熒光眼底血管造影檢測(cè)
    3 結(jié)果
        3.1 低氧誘導(dǎo)小鼠視網(wǎng)膜病變模型的建立
        3.2 視網(wǎng)膜新生血管增殖性病變的定量分析
        3.3 AAV作為載體感染視網(wǎng)膜細(xì)胞的鑒定
    4 討論
第三部分：rAAV-HGFK1對(duì)OIR模型小鼠視網(wǎng)膜新生血管病變的影響
    1 前言
    2 材料和方法
        2.1 主要材料和試劑
        2.2 主要儀器和設(shè)備
        2.3 動(dòng)物模型的建立與處理
        2.4 視網(wǎng)膜新生血管增殖病變鑒定及定量分析
        2.5 熒光眼底血管造影檢測(cè)
        2.6 S-P法免疫組化(CD31)檢測(cè)血管內(nèi)皮細(xì)胞
        2.7 EnVision法免疫組化(VEGF)
    3 結(jié)果
        3.1 新生血管增殖的定量分析
        3.2 新生血管增殖的定性分析
        3.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)CD31及VEGF的表達(dá)
        3.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的稱重
    4 討論
    5 結(jié)論
本研究創(chuàng)新性的自我評(píng)價(jià)
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀學(xué)位期間取得的研究成果
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷



本文編號(hào)：3765989