目的:老年性白內(nèi)障是全世界首位的可逆性致盲性眼病,其發(fā)病與晶狀體上皮細(xì)胞（LECs）內(nèi)活性氧簇（ROS）過量積聚及線粒體功能紊亂導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。目前認(rèn)為過氧化氫（H2O2）是引起老年性白內(nèi)障的最主要的氧化應(yīng)激物質(zhì)。近年的研究發(fā)現(xiàn),一氧化碳（CO）分子作為體內(nèi)血紅素加氧酶（HO）的代謝產(chǎn)物之一,可以通過抗氧化、抗炎癥、抗凋亡等分子機(jī)制對多種疾病起到治療效果,具有潛在的臨床應(yīng)用價(jià)值。目前關(guān)于CO對晶狀體上皮細(xì)胞是否具有保護(hù)作用未見報(bào)道。因此,為了進(jìn)一步研究HO-1保護(hù)LECs的具體作用機(jī)制,初步探索CO預(yù)處理對LECs的保護(hù)效果,及CO與線粒體應(yīng)激在H2O2誘導(dǎo)LECs損傷模型中相關(guān)性,本研究采用不同濃度的一氧化碳釋放分子-3（CORM-3）作為CO釋放的載體,并建立兔源性LECs的氧化應(yīng)激損傷模型,同時(shí)優(yōu)化H202及CORM-3的最佳濃度與作用時(shí)間,進(jìn)一步探討CORM-3預(yù)處理對于H2O2誘導(dǎo)的兔LECs損傷的保護(hù)效果及作用機(jī)制。方法:取新西蘭兔前囊膜與赤道部囊膜,于體外分離、鑒定、培養(yǎng)原代LECs。CCK-8法確定H2O2、CORM-3及iCORM-3的最佳實(shí)驗(yàn)濃度及作用時(shí)間。... 

【文章來源】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院北京市

【文章頁數(shù)】：110 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．免疫熒光法鑒定體外分離、傳代的兔原代晶狀體上皮細(xì)胞（Ｘ４０）將??４Ｘ?１０３個細(xì)胞／孔濃度的兔ＬＥＣｓ接種于１２孔板內(nèi)

圖２．?ＣＣＫ－８法測定兔ＬＥＣｓ的存活率并確定Ｈ２０２的半數(shù)致死量（ＬＤ５。）濃度（Ａ）??相差顯微鏡觀察兔ＬＥＣｓ在不同Ｈ２０２濃度梯度作用下的細(xì)胞形態(tài)變化（Ｘ１００）。（Ｂ）??ＣＣＫ－８試劑與不同處理組共同孵育３ｈ，并使其終濃度達(dá)到１０％，應(yīng)用酶標(biāo)儀測定溶液??光密度，并以Ｍｅａｎ土ＳＤ?（平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差）表示，所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)３次。??３．２?Ｃ０ＲＭ－３實(shí)驗(yàn)最佳濃度及作用時(shí)間的確定??首先通過氧合肌紅蛋白間接測定Ｃ０ＲＭ－３與ｉＣＯＲＭ－３的Ｃ０釋放情況（圖３）。在??３７°Ｃ，ＰＨ＝７．?３７±０．?０８?的條件下，不同濃度的?Ｃ０ＲＭ－３?（２５?ｕ?Ｍ，５０?ＵＭ，１００?ＰＭ，?２００?ｕＭ）??在６０ｍｉｎ內(nèi)均以線性模式釋放⑶，Ｃ０釋放量與釋放速度與溶液Ｃ０ＲＭ－３濃度線性相關(guān)。??１９??

并以Ｍｅａｎ土ＳＤ?（平均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差）表示，所有實(shí)驗(yàn)均獨(dú)立重復(fù)３次。??３．２?Ｃ０ＲＭ－３實(shí)驗(yàn)最佳濃度及作用時(shí)間的確定??首先通過氧合肌紅蛋白間接測定Ｃ０ＲＭ－３與ｉＣＯＲＭ－３的Ｃ０釋放情況（圖３）。在??３７°Ｃ，ＰＨ＝７．?３７±０．?０８?的條件下，不同濃度的?Ｃ０ＲＭ－３?（２５?ｕ?Ｍ，５０?ＵＭ，１００?ＰＭ，?２００?ｕＭ）??在６０ｍｉｎ內(nèi)均以線性模式釋放⑶，Ｃ０釋放量與釋放速度與溶液Ｃ０ＲＭ－３濃度線性相關(guān)。??１９??


本文編號：3592997