[目的]1.構(gòu)建重組腺病毒搭載的基因]mda-7（melanoma differentiation-associated gene-7,黑色素瘤分化相關(guān)基因-7）／IL-24（Interleukin-24,白介素24）。2.使用構(gòu)建好的載體系統(tǒng)Ad-mda-7/IL-24感染人喉癌Hep-2細胞系后通過定性、定量方法觀察對喉癌細胞生長的影響。[方法]1.鑒定pPEP4質(zhì)粒上的mda-7/IL-24, KpnI和XhoI限制性核酸內(nèi)切酶消化腺病毒穿梭質(zhì)粒載體pAdtrackCMV（含綠色熒光蛋白GFP）,連接后轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coli DH5a,卡那霉素篩選克隆,抽提質(zhì)粒,酶切、PCR鑒定；PmeI單酶切線性化搭載mda-7/IL-24基因的穿梭質(zhì)粒pAdTrackCMV-mda7,與腺病毒骨架質(zhì)粒AdEasy-1一起電轉(zhuǎn)化至重組專用感受態(tài)細胞BJ5183,兩質(zhì)粒同源重組,卡那霉素+鏈霉素雙抗篩選克隆,質(zhì)粒抽提、電泳,PacI單酶切鑒定重組克隆,將陽性克隆質(zhì)粒再轉(zhuǎn)化入E.coli DH5a感受態(tài),卡那霉素篩選克隆,再次抽提質(zhì)粒,電泳、酶切、PCR鑒定獲得pAd-mda7和pAd-GFP;限... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

mda一7/IL一24在超生理水平下作用腫瘤細胞時相關(guān)信號通路，摘自[l5]

pAdTrackCMV質(zhì)粒圖譜

pAdTrackCMV質(zhì)粒圖譜圖3，AdEasy一1質(zhì)粒圖譜均購自于美國stratagene公司，包括:(l)穿梭質(zhì)粒pAdTraekCMV抗卡那霉素(KAN)，標(biāo)記有綠色熒光蛋白，具有目的基因嵌入?yún)^(qū)域以及骨架質(zhì)粒AdEasyl的同源重組位點(2)腺病毒骨架質(zhì)粒AdEasyl氨節(jié)青霉素(AMP)抗性，與骨架質(zhì)粒pAdTrackCMv的同源重組位點(3)重組優(yōu)化大腸桿菌 BJS183抗鏈霉素(STREP)，同源重組效率高的一種大腸桿菌，提高兩種質(zhì)粒同源重組的平臺。


本文編號：3533007