本文關(guān)鍵詞：Netrin-1促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)及作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的通過體外實(shí)驗(yàn)(小鼠角膜上皮干/祖細(xì)胞系,TKE2細(xì)胞)與體內(nèi)實(shí)驗(yàn)(STZ,鏈脲菌素,誘導(dǎo)I型糖尿病小鼠),觀察Netrin-1(神經(jīng)軸突導(dǎo)向因子)對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)過程角膜上皮愈合、炎癥反應(yīng)及神經(jīng)修復(fù)的作用,并探討其作用機(jī)制。方法1.體外實(shí)驗(yàn)體外培養(yǎng)小鼠角膜上皮干/祖細(xì)胞(TKE2細(xì)胞)及原代三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分組:正常組、甘露醇組、高糖組及高糖+Netrin-1組。檢測(cè)正常組與高糖組TKE2細(xì)胞內(nèi)源性Netrin-1表達(dá)量的差異。高糖環(huán)境培養(yǎng)TKE2細(xì)胞,進(jìn)行如下檢測(cè):Netrin-1對(duì)TKE2細(xì)胞遷移能力與增殖能力的影響;Netrin-1對(duì)TKE2細(xì)胞ERK及EGFR信號(hào)通路的作用;Netrin-1對(duì)TKE2細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響。高糖環(huán)境培養(yǎng)原代三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞,觀察Netrin-1對(duì)三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的影響。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)選取鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的C57/BL6 I型糖尿病小鼠與正常C57/BL6小鼠。建立小鼠角膜上皮損傷模型,給藥方式為結(jié)膜下注射。實(shí)驗(yàn)分組:正常組、糖尿病組、糖尿病+Netrin-1組、糖尿病A2BAR拮抗劑組、糖尿病UNC5B中和抗體組。檢測(cè)正常與糖尿病小鼠角膜上皮內(nèi)源性Netrin-1表達(dá)量差異;觀察Netrin-1對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷愈合速率的影響;檢測(cè)Netrin-1對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷后炎癥反應(yīng)的影響;觀察Netrin-1對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷后神經(jīng)纖維修復(fù)的作用;檢測(cè)Netrin-1影響糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)的相關(guān)信號(hào)通路與主要作用受體。結(jié)果1.體外實(shí)驗(yàn)部分通過對(duì)TKE2細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究,結(jié)果發(fā)現(xiàn):與正常組相比,高糖組TKE2細(xì)胞內(nèi)源性Netrin-1的表達(dá)量較少(P0.05);細(xì)胞劃痕后,高糖組TKE2細(xì)胞的遷移面積明顯低于正常組與高糖+Netrin-1組(P0.05);細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)顯示:高糖組TKE2細(xì)胞數(shù)量較正常組與高糖+Netrin-1組明顯減少(P0.05);外源性Netrin-1能激活并上調(diào)正常組TKE2細(xì)胞中p-ERK與p-EGFR的表達(dá)量;高糖組TKE2細(xì)胞p-ERK與p-EGFR的表達(dá)量較正常組明顯降低(P0.05),高糖+Netrin-1組明顯高于正常組與高糖組(P0.01)。高糖組TKE2細(xì)胞ROS表達(dá)水平明顯高于正常組與高糖+Netrin-1組(P0.01);高糖組TKE2細(xì)胞GSH表達(dá)水平明顯低于正常組與高糖+Netrin-1組(P0.01)。高糖組原代培養(yǎng)的三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突生長(zhǎng)的長(zhǎng)度與正常組相比較短(P0.05),高糖+Netrin-1組與高糖組相比明顯增長(zhǎng)(P0.05)。2.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)部分通過對(duì)正常與糖尿病小鼠進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn):與正常組相比,糖尿病組小鼠角膜上皮內(nèi)源性Netrin-1表達(dá)量明顯減少(P0.05);小鼠角膜上皮刮除后,糖尿病組的愈合速率與正常組相比明顯減慢(P0.05),糖尿病+netrin-1組與糖尿病組相比明顯增快(P0.05);糖尿病組小鼠角膜上皮刮除后24h促炎性細(xì)胞相關(guān)因子COX-2、CXCL10、CXCL11、CXCL12表達(dá)量、48h中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)數(shù)量、M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)記i NOS、IL-12的表達(dá)量及上皮刮除后72h M1型巨噬細(xì)胞數(shù)量較正常組顯著增高(P0.05),而糖尿病+Netrin-1組與糖尿病組相比則顯著下降(P0.05);糖尿病組小鼠角膜上皮刮除后72h角膜M2型巨噬細(xì)胞及其標(biāo)記物Arginase-1與IL-10表達(dá)量較正常組顯著減少(P0.05),而糖尿病+Netrin-1組較糖尿病組顯著增加(P0.05);小鼠角膜上皮刮除后糖尿病小鼠角膜上皮神經(jīng)再生的長(zhǎng)度明顯較正常組縮短(P0.05),糖尿病+netrin-1組較糖尿病組顯著增長(zhǎng)。糖尿病組小鼠角膜損傷后再生上皮p-ERK與p-EGFR的表達(dá)強(qiáng)度較正常組明顯減弱,糖尿病+netrin-1組較糖尿病組相比顯著增強(qiáng);糖尿病A2BAR拮抗劑組小鼠角膜上皮愈合速率與糖尿病+Netrin-1組相比明顯減慢(P0.05),再生角膜上皮p-ERK的表達(dá)量下降,上皮損傷后72h角膜M2型巨噬細(xì)胞的數(shù)量減少;糖尿病UNC5B中和抗體組小鼠與糖尿病+Netrin-1組相比無顯著差異。結(jié)論Netrin-1促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮損傷愈合;Netrin-1抑制糖尿病小鼠角膜上皮損傷后早期炎癥反應(yīng)及誘導(dǎo)M1型巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)化M2型巨噬細(xì)胞以促進(jìn)炎癥消退;Netrin-1可促進(jìn)角膜神經(jīng)的再生與修復(fù);Netrin-1促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮損傷修復(fù)與其激活p-ERK與p-EGFR信號(hào)通路有關(guān);Netrin-1對(duì)p-ERK信號(hào)通路的激活、抑制炎性細(xì)胞浸潤(rùn)與促進(jìn)巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)型可能是通過A2BAR受體介導(dǎo)的。此外,Netrin-1促進(jìn)糖尿病小鼠角膜上皮的修復(fù)可能與其抗氧化應(yīng)激作用有關(guān)。結(jié)論
【關(guān)鍵詞】：Netrin-1 I型糖尿病小鼠 高糖 p-ERK p-EGFR A2BAR 巨噬細(xì)胞 三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：濟(jì)南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R587.2;R772.2
【目錄】：

• 摘要9-12
• Abstract12-15
• 主要符號(hào)表15-16
• 引言16-18
• 第一部分 體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)18-39
• 第1章 材料與方法18-31
• 1.1 材料與試劑18-22
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 第2章 結(jié)果31-39
• 2.1 高糖環(huán)境對(duì)TKE2細(xì)胞內(nèi)源性Netrin-1 表達(dá)的影響31-32
• 2.2 外源性Netrin-1 對(duì)高糖環(huán)境TKE2細(xì)胞遷移能力的影響32-33
• 2.3 外源性Netrin-1 對(duì)高糖環(huán)境TKE2細(xì)胞增殖能力的影響33-34
• 2.4 外源性Netrin-1 對(duì)TKE2細(xì)胞ERK與EGFR信號(hào)通路的影響34-35
• 2.5 外源性Netrin-1 對(duì)高糖環(huán)境TKE2細(xì)胞ERK與EGFR信號(hào)通路的影響35-36
• 2.6 外源性Netrin-1 對(duì)高糖環(huán)境TKE2細(xì)胞氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響36-37
• 2.7 外源性Netrin-1 對(duì)高糖環(huán)境原代培養(yǎng)三叉神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的影響37-39
• 第二部分 體內(nèi)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)39-55
• 第1章 材料與方法39-47
• 1.1 材料與試劑39-41
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法41-47
• 第2章 結(jié)果47-55
• 2.1 內(nèi)源性Netrin-1 在正常與糖尿病小鼠角膜上皮表達(dá)差異47-48
• 2.2 Netrin-1 對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷愈合速率的影響48-49
• 2.3 Netrin-1 對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮ERK與EGFR信號(hào)通路的影響49
• 2.4 Netrin-1 對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷后炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)型的影響49-52
• 2.5 Netrin-1 影響糖尿病小鼠角膜上皮損傷的修復(fù)及M2型巨噬細(xì)胞的轉(zhuǎn)型與其受體A2BAR的關(guān)系52-54
• 2.6 Netrin-1 對(duì)糖尿病小鼠角膜上皮損傷后神經(jīng)修復(fù)的影響54-55
• 討論55-58
• 結(jié)論58-59
• 參考文獻(xiàn)59-63
• 綜述63-77
• 參考文獻(xiàn)70-77
• 攻讀學(xué)位期間取得的研究成果77-79
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的論文77-78
• 攻讀學(xué)位期間申請(qǐng)的專利78
• 攻讀學(xué)位期間會(huì)議發(fā)言78
• 碩士期間參與的課題78-79
• 致謝79

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中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李擁軍;柳夏林;劉昌偉;管珩;林清;;1型糖尿病小鼠下肢缺血恢復(fù)受損的機(jī)制[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2007年06期

2 李予蓉,謝艷華,范風(fēng)云,王思功,曾桂英;中藥雙參膠囊對(duì)小鼠實(shí)驗(yàn)性糖尿病的影響[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2000年02期

3 逄兵,金泰^

本文編號(hào)：331244