發(fā)布時(shí)間：2021-07-06 12:22

　　【目的】為明確Cofilin-2基因與鼻咽癌放射抗拒的關(guān)系,本研究應(yīng)用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建穩(wěn)定的Cofilin-2基因沉默CNE-2R細(xì)胞模型,通過細(xì)胞體內(nèi)、外的功能學(xué)實(shí)驗(yàn)探討沉默Cofilin-2對CNE-2R細(xì)胞放射敏感性的影響,明確Cofilin-2是否可以作為預(yù)測鼻咽癌放射治療反應(yīng)的蛋白標(biāo)志物及潛在的治療靶點(diǎn),并進(jìn)一步通過人類基因表達(dá)譜芯片,測序分析Cofilin-2沉默后引起CNE-2R細(xì)胞的基因表達(dá)譜的改變,初步探討Cofilin-2參與鼻咽癌放射抗拒的機(jī)制及通路�！痉椒ā�1.針對Cofilin-2設(shè)計(jì)并合成3條干擾靶點(diǎn),篩選最佳沉默片段進(jìn)行慢病毒包裝轉(zhuǎn)染鼻咽癌CNE-2R細(xì)胞,并分選獲得穩(wěn)定沉默Cofilin-2基因的鼻咽癌CNE-2R細(xì)胞模型;采用q RT-PCR及Western-blot實(shí)驗(yàn)檢測其m RNA及蛋白水平的表達(dá)情況,驗(yàn)證干擾效果。2.選用轉(zhuǎn)染效果最好的Cofilin2-RNAi-LV3細(xì)胞株作為實(shí)驗(yàn)組,通過CCK-8法、克隆形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)觀察沉默Cofilin-2基因后鼻咽癌CNE-2R細(xì)胞的增殖,周期分布、凋亡的變化情況,探討Cofilin-2與鼻咽... 

【文章來源】：廣西醫(yī)科大學(xué)廣西壯族自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：132 頁

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

pHelper1.0載體

3.5 RNAi 重組慢病毒轉(zhuǎn)染 CNE-2R 細(xì)胞3.5.1 siRNA 靶序列的設(shè)計(jì)如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒載體構(gòu)建包括：pHelper 1. 0 載體及 pHelper 2. 0 載體、載體(如圖 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉?jiǎng)P公司提供）。

3.5 RNAi 重組慢病毒轉(zhuǎn)染 CNE-2R 細(xì)胞3.5.1 siRNA 靶序列的設(shè)計(jì)如表 1-2 所示:表 1-2 CFL2-siRNA 序列信息表Table 1-2 CFL2 siRNA sequenceNO. Accession Target Seq CDS GC%CFL2-RNAi(49280-1) NM_021914 TTCGACACTTGGAGAGAAA 142..642 42.1CFL2-RNAi(49281-1) NM_021914 TAGCTCTAAAGATGCCATT 142..642 36.8CFL2-RNAi(49282-1) NM_021914 ATGCCACATACGAAACAAA 142..642 36.83.5.2 慢病毒載體構(gòu)建包括：pHelper 1. 0 載體及 pHelper 2. 0 載體、載體(如圖 1-1、 1-2,、1-3，由上海吉?jiǎng)P公司提供）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]β-elemene enhances the radiosensitivity of gastric cancer cells by inhibiting Pak1 activation[J]. Jun-Song Liu,Xiang-Ming Che,Shuai Chang,Guang-Lin Qiu,Shi-Cai He,Lin Fan,Wei Zhao,Zheng-Liang Zhang,Shu-Feng Wang.  World Journal of Gastroenterology. 2015(34)
[2]蛋白組學(xué)分析放射抗拒性鼻咽癌細(xì)胞差異表達(dá)蛋白[J]. 王中衛(wèi),王亞利,金迎迎,任宏濤.  西安交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2014(06)
[3]鼻咽癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)分子蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選與鑒定[J]. 朱玉亮,劉玉猛,陸小軍,賈衛(wèi)華,洪明晃.  中華腫瘤防治雜志. 2014(17)
[4]血漿cofilin蛋白檢測在肺癌診斷中的價(jià)值[J]. 鄭育舉,方曄,李紹金,鄭邦希.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2013(10)
[5]Effect of silencing Bcl-2 expression by small interfering RNA on radiosensitivity of gastric cancer BGC823 cells[J]. Hong-Tao Liu,Chun-Lei Lu.  Asian Pacific Journal of Tropical Medicine. 2013(01)
[6]不同臨床類型原發(fā)鼻咽癌組織差異表達(dá)蛋白[J]. 何迎春,陳艷,廖端芳,何蘭,林麗美,范婧瑩,田道法.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2012(12)
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[8]蛋白質(zhì)組學(xué)方法識(shí)別nm23-H1為鼻咽癌的轉(zhuǎn)移抑制蛋白和預(yù)后因子（英文）[J]. 李雪兵,胡蓉,瞿家權(quán),賀秋艷,陳瑜,李嬌陽,葉旭,向亞莉,易紅.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2012(01)
[9]EGFR及NF-κB與鼻咽癌放射敏感性的相關(guān)性研究[J]. 楊春妮,楊一兵,艾毅欽.  臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志. 2009(15)
[10]鼻咽癌血清蛋白質(zhì)雙向電泳圖譜分析[J]. 李雪華,李欣,徐守軍,趙亮,丁彥青.  天津醫(yī)藥. 2008(11)

博士論文
[1]鼻咽癌放射抵抗機(jī)制的蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 章華.中南大學(xué) 2007

碩士論文
[1]采用定量蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關(guān)甲基化失活基因[D]. 崔發(fā)財(cái).中南大學(xué) 2012
[2]采用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選鼻咽癌轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白[D]. 陳麗霞.廣西醫(yī)科大學(xué) 2009
[3]血清蛋白質(zhì)譜分析在鼻咽癌中的初步研究[D]. 倪曉雷.福建醫(yī)科大學(xué) 2008
[4]鼻咽癌血清比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究[D]. 李雪華.第一軍醫(yī)大學(xué) 2004



本文編號(hào)：3268234