目的:通過脂多糖（Lipopolysaccharide,LPS）刺激角膜基質(zhì)細胞誘導(dǎo)其炎癥反應(yīng),并測定microRNA-21（miR-21）在炎癥反應(yīng)中的表達,并揭示miR-21對角膜基質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)的調(diào)節(jié)作用及機制。方法:1.應(yīng)用LPS誘導(dǎo)角膜基質(zhì)細胞炎癥反應(yīng),并通過實時定量PCR（realtime PCR,qPCR）的方法檢測人角膜基質(zhì)細胞在炎癥反應(yīng)中炎性細胞因子以及miR-21的表達變化。2.增強或抑制miR-21的表達,并觀察人角膜基質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)的變化。2.1)藉由脂質(zhì)體將hsa-miR-21agomir轉(zhuǎn)染細胞以過表達miR-21,檢測過表達miR-21對角膜基質(zhì)細胞炎癥反應(yīng)的影響。通過qPCR檢測miRNA-21 mRNA的表達,通過qPCR、Elisa檢測IL-6、IL-8在mRNA及蛋白分水平的表達,并結(jié)合CCK8檢測及細胞遷移實驗檢測過表達miR-21對角膜基質(zhì)細胞增殖及細胞遷移的影響。2.2)轉(zhuǎn)染hsa-miR-21antagomir以抑制miR-21的表達,檢測抑制miR-21表達對角膜基質(zhì)細胞在炎癥反應(yīng)的影響。通過qPCR檢測miRNA-21 mRNA的表達,... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：52 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

1CCK8檢測不同濃度LPS細胞存活率

圖 2.1.2 正常對照組及 LPS 組 IL-6、IL-8 mRNA 相對表達量PS 刺激后 qPCR 檢測 miRNA-21 的表達 1ug/mlLPS 刺激細胞 48h 后，qPCR 檢測 miRNA-21 表達，如正常對照組作為基線, 采用 2-△△CT法計算 LPS 組相對于正-21 的表達量變化,與正常對照組相比，LPS 刺激細胞后 miRNA具有劑量依賴性（F=74.8 P＜0.001）。

3LPS刺激后miRNA-21的表達

【參考文獻】：
期刊論文
[1]MicroRNA: A matter of life or death[J]. Zhiguo Wang, Research Center, Montreal Heart Institute and Department of Medicine, University of Montreal, Montreal, PQ H1T 1C8, Canada.  World Journal of Biological Chemistry. 2010(04)



本文編號：2952034