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視網膜小膠質細胞P2X7-NLRP3/Caspase-1通路在脈絡膜新生血管中的作用機制

發(fā)布時間:2020-12-25 07:15
  目的:研究C57BL/6J小鼠激光誘導脈絡膜新生血管(CNV)形成過程中CD11b、P2X7、NLRP3/Caspase-1炎癥小體和IL-1β的變化,探討視網膜小膠質細胞通過P2X7-NLRP3/Caspase-1炎癥小體通路介導的在CNV發(fā)生發(fā)展中的作用機制,為濕性AMD新的防治方法提供科學依據。方法:40只C57BL/6J小鼠隨機分為正常對照組和CNV激光模型組。采用氪紅激光照射(激光參數:波長647nm,能量200mW,光斑直徑80um,照射時間100ms)視網膜,每只眼圍繞視盤在其周圍距離1個視盤直徑的血管間光凝5個點。實驗各組于激光照射后第4天取材,應用眼底熒光素血管造影(FFA)和光相干斷層掃描(OCT)一體機以及蘇木精-伊紅染色(HE)觀察激光照射處CNV是否形成;應用免疫熒光檢測視網膜冰凍切片P2X7和NLRP3/Caspase-1炎癥小體和IL-1β的表達情況;Western Blot檢測CD11b、P2X7、NLRP3炎癥小體、Caspase-1和IL-1β蛋白含量的表達;實時熒光定量PCR檢測CD11b、P2X7、NLRP3炎癥小體、Caspase-1和IL-1... 

【文章來源】:武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數】:50 頁

【學位級別】:碩士

【部分圖文】:

視網膜小膠質細胞P2X7-NLRP3/Caspase-1通路在脈絡膜新生血管中的作用機制


圖1.?1視網膜小膠質細胞通過P2X7-NLRP3/Caspase-1炎癥小體通路對RPE細胞和脈絡膜血管??內皮細胞的作用機制示意圖??

視網膜


斑區(qū)早期可見強熒光改變,晚期熒光素滲漏擴大,呈邊界模糊的高熒光區(qū),??證明CNV形成。OCT示:正常對照組小鼠視網膜各層結果清晰,RPE層連續(xù);??模型組小鼠視網膜RPE層不連續(xù),可見梭性隆起的高信號(圖3.1)。??Nomal?Laser??臓??mam??MM??圖3.1?FFA示:正常對照組視網膜的血管以視盤為中心呈放射狀改變,脈絡膜血管呈網狀分布,視網膜血??管充盈良好,未見異常熒光素滲漏;激光造模組激光斑區(qū)早期可見強熒光改變,晚期熒光素滲漏擴大,呈??邊界模糊的高熒光區(qū),證明CNV形成。OCT示:正常對照組小鼠視網膜各層結果清晰,RPE層連續(xù);模型組小??鼠視網膜RPE層不連續(xù),可見梭性隆起的高信號。??14??

冰凍切片,抗體,視網膜,小鼠


?■■■??圖3.?4視網膜冰凍切片CD11b和P2X7染色。Merge圖中激光斑處黃色箭頭所指為兩種抗體共標的陽性細胞。??(GCL:神經節(jié)細胞層;1NL:內核層;ONL:外核層)IF*200??16??


本文編號:2937195

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