目的幾丁糖是作用很廣的天然提取產(chǎn)物,臨床適應癥主要為防治外科術后組織粘連,在眼科被用于抑制視網(wǎng)膜炎癥等研究。甲狀腺相關性眼病(GO)病理表現(xiàn)為眼眶炎癥和眶周軟組織大量重構,目前幾丁糖在甲狀腺相關性眼病中的作用,尚不清楚。本課題選取GO眼眶成纖維細胞為研究對象,從眼眶成纖維細胞炎癥因子及脂肪生成的角度探討幾丁糖在甲狀腺相關性眼病中的作用及機制。方法原代培養(yǎng)GO眼眶成纖維細胞。通過CCK-8(Cell Counting Kit-8)、流式細胞儀檢測凋亡及細胞周期來評價不同濃度幾丁糖對眼眶成纖維細胞活性影響。通過IL-1β與幾丁糖共培養(yǎng)眼眶成纖維細胞,用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)檢測不同時間點細胞上清液中interleukin-6(IL-6)和prostaglandin E-2(PGE-2)蛋白水平。通過實時定量PCR(real-time PCR)和Western-Blot檢測cyclooxygenase-2(COX-2)表達水平。Western-Blot檢測JNK信號通路磷酸化水平。在脂肪誘導培養(yǎng)基中,對眼眶成纖維細胞進行脂肪細胞分化誘導,采用幾丁糖進行干預處理。油紅染色觀察脂肪細胞生成情況,Western-Blot檢測FABP-4,adiponectin,C/EBPα和PPAR-γ等蛋白表達水平和AKT信號通路磷酸化水平。結果0.1mg/ml和0.01mg/ml幾丁糖對眼眶成纖維細胞活性無影響。IL-1β可誘導眼眶成纖維細胞IL-6和PGE-2蛋白生成增加。幾丁糖可明顯抑制IL-1β誘導的IL-6和PGE-2蛋白產(chǎn)生,降低COX-2mRNA和蛋白表達。JNK抑制劑可減少IL-6和PGE-2蛋白產(chǎn)生。幾丁糖可抑制JNK信號通路磷酸化。油紅染色表明幾丁糖可明顯抑制眼眶成纖維細胞向脂肪細胞分化,減少脂肪細胞生成,同時抑制FABP-4,adiponectin,C/EBPα和PPAR-γ等蛋白表達水平,降低AKT磷酸化水平。結論幾丁糖可明顯抑制眼眶成纖維細胞炎癥因子和脂肪生成,其機制可能分別與降低JNK和AKT磷酸化水平有關。
【學位單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位年份】：2018
【中圖分類】：R581;R771.3
【文章目錄】：
符號說明
中文摘要
英文摘要
前言
    參考文獻
第一部分 甲狀腺相關性眼病眼眶成纖維細胞原代培養(yǎng)
    前言
    1 材料和方法
    2 結果
    3 結論
    4 討論
    參考文獻
    附圖
第二部分 幾丁糖對眼眶成纖維細胞活性影響
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計學方法
    3 結果
    4 結論
    5 討論
    參考文獻
    附圖
第三部分 幾丁糖抑制IL-1β誘導眼眶成纖維細胞炎癥因子的作用及機制研究
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計學方法
    3 結果
    4 結論
    5 討論
    參考文獻
    附圖
第四部分 幾丁糖抑制眼眶成纖維細胞脂肪生成的作用及機制研究
    前言
    1 材料和方法
    2 統(tǒng)計學方法
    3 結果
    4 結論
    5 討論
    參考文獻
    附圖
全文總結
文獻綜述
    參考文獻
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術論文、參研項目、會議交流情況

【參考文獻】

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本文編號：2850231