發(fā)布時(shí)間：2020-08-15 20:35

【摘要】：視神經(jīng)在眼眶內(nèi)活動(dòng)程度受限，以致在頭部受到外力沖擊時(shí)極易造成直接和間接的原發(fā)性損傷，以及其后產(chǎn)生的包括血管痙攣或栓塞導(dǎo)致視神經(jīng)的缺血、變性或壞死，以及免疫與炎性反應(yīng)等繼發(fā)性損害。髓樣分化因子88（MyD88）是多種固有免疫受體在細(xì)胞內(nèi)的銜接蛋白，其依賴途徑參與脊髓損傷與修復(fù)，在腦損傷后的炎癥反應(yīng)中起關(guān)鍵作用。視神經(jīng)同屬中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因此我們認(rèn)為MyD88可能是調(diào)控視神經(jīng)創(chuàng)傷后炎癥反應(yīng)的靶點(diǎn)，對(duì)視神經(jīng)損傷的修復(fù)發(fā)揮重要作用。 本研究分以下四個(gè)部分：（1）成年SD大鼠視神經(jīng)夾傷/離斷模型的建立與改良；（2）阻斷MyD88通路對(duì)成年大鼠視神經(jīng)離斷后視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGCs）存活的影響；（3）阻斷MyD88通路對(duì)成年大鼠視神經(jīng)夾傷后視神經(jīng)干中TLR4、NF-κB表達(dá)的影響；（4）阻斷MyD88通路對(duì)成年大鼠視神經(jīng)夾傷后視神經(jīng)干中GAP-43表達(dá)的影響。 第一部分：成年大鼠視神經(jīng)夾傷與離斷模型的建立和改良 成年大鼠視神經(jīng)夾傷/離斷模型已趨成熟，在相關(guān)領(lǐng)域基礎(chǔ)研究中應(yīng)用廣泛。然而，既往建模手術(shù)方法繁瑣，難度較大，手術(shù)耗時(shí)較長(zhǎng)，加之目前常用的單一麻醉方法容易造成大鼠呼吸抑制而死亡。本文作者在建立視神經(jīng)損傷動(dòng)物模型時(shí)，在開創(chuàng)部位、操作方法和麻醉方法等方面進(jìn)行了改良。 結(jié)論：以戊巴比妥和陸眠寧聯(lián)合麻醉取代單一戊巴比妥鈉麻醉，并使用可產(chǎn)生恒定夾傷力的特制動(dòng)脈瘤夾，能夠縮短手術(shù)時(shí)間，并降低手術(shù)難度和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的死亡率。 第二部分：阻斷MyD88通路對(duì)視神經(jīng)離斷后RGCs存活的影響 方法：成年大鼠左側(cè)視神經(jīng)離斷后隨機(jī)分為三組：（1）MIP實(shí)驗(yàn)組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射MyD88抑制肽；（2）CP對(duì)照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射對(duì)照肽；（3）PBS對(duì)照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射PBS緩沖液。術(shù)后14d處死各組大鼠，視網(wǎng)膜取材，4%多聚甲醛后固定后視網(wǎng)膜全鋪片，計(jì)數(shù)熒光金逆行標(biāo)記的RGCs并計(jì)算出存活RGCs平均密度。 結(jié)果：MIP實(shí)驗(yàn)組存活節(jié)細(xì)胞平均密度（1206±134/mm2）較CP對(duì)照組（908±112/mm2）和PBS對(duì)照組（879±123/mm2）顯著增高（p0.01），而CP和PBS兩對(duì)照組間無顯著差異（p0.05）。 結(jié)論：阻斷MyD88通路對(duì)成年大鼠視神經(jīng)損傷后的RGCs具有神經(jīng)保護(hù)作用。 第三部分：阻斷MyD88通路對(duì)夾傷視神經(jīng)干中TLR4和NF-kB表達(dá)的影響 方法：成年大鼠左側(cè)視神經(jīng)夾傷后隨機(jī)分為四組：（1）MIP實(shí)驗(yàn)組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射MyD88抑制肽；（2）CP對(duì)照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射對(duì)照肽；（3）PBS對(duì)照組：左眼玻璃體腔內(nèi)注射PBS緩沖液；（4）空白對(duì)照組：視神經(jīng)夾傷后未予任何處理。于視神經(jīng)損傷后1d、3d、7d或14d處死動(dòng)物，視神經(jīng)干取材行蛋白質(zhì)免疫印記（Western Blot）實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：（1）與空白對(duì)照組相比，MIP實(shí)驗(yàn)組、CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組TLR4蛋白表達(dá)量在1d、3d、7d及14d所有時(shí)間點(diǎn)均顯著增高（p＜0.01）；在術(shù)后1d時(shí)間點(diǎn)，MIP實(shí)驗(yàn)組、CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組間TLR4蛋白表達(dá)量無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）；當(dāng)術(shù)后存活時(shí)間升至3d、7d及14d時(shí)，MIP實(shí)驗(yàn)組較CP對(duì)照組及PBS對(duì)照組TLR4蛋白表達(dá)量顯著降低（p＜0.01），而CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組間均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。（2）與空白對(duì)照組相比，MIP實(shí)驗(yàn)組、CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組NF-κB蛋白表達(dá)量在1d、3d、7d及14d所有時(shí)間點(diǎn)均顯著增高（p＜0.01）；MIP組NF-κB表達(dá)量在各時(shí)間點(diǎn)較CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組均有顯著降低（p＜0.01），但CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組在各時(shí)間點(diǎn)的NF-κB表達(dá)量并無明顯差異（p＞0.05）。 結(jié)論：早期阻斷MyD88通路對(duì)視神經(jīng)損傷后RGCs的保護(hù)作用，與TLR4和NF-κB蛋白表達(dá)的下調(diào)相關(guān)。 第四部分：阻斷MyD88通路對(duì)夾傷視神經(jīng)干中GAP-43表達(dá)的影響 第四部分采用夾傷模型的建造及處理方法，分為四組，即完全空白對(duì)照的Con組、以及經(jīng)手術(shù)和術(shù)后玻璃體注射處理的MIP組、CP組及PBS組。待模型制造完成后于1d、3d、7d及14d不同時(shí)間點(diǎn)對(duì)大鼠處死進(jìn)行視神經(jīng)干的取材。視神經(jīng)干組織直接存放于-70℃冰箱待進(jìn)行Western-blot實(shí)驗(yàn)。 結(jié)果：在視神經(jīng)損傷后1d、3d、7d及14d所有時(shí)間點(diǎn)，MIP實(shí)驗(yàn)組、CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組GAP-43蛋白表達(dá)量與空白對(duì)照組相比均顯著增高（p＜0.01），MIP實(shí)驗(yàn)組較CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組GAP-43蛋白表達(dá)量顯著增高（p＜0.01），而CP對(duì)照組和PBS對(duì)照組間GAP-43蛋白表達(dá)量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p＞0.05）。MIP實(shí)驗(yàn)組GAP-43蛋白表達(dá)量隨術(shù)后存活時(shí)間的增加而逐漸增高，術(shù)后7d時(shí)達(dá)到最高值，但術(shù)后14d表達(dá)值明顯下降。 結(jié)論：早期阻斷MyD88通路可提高RGC的軸突再生能力。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R779.1

【引證文獻(xiàn)】

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1 王乾;劉新;;急性閉角型青光眼發(fā)病機(jī)制與Toll樣受體及髓樣分化因子88免疫調(diào)節(jié)作用的相關(guān)性分析[J];臨床眼科雜志;2016年06期

本文編號(hào)：2794610