【摘要】：目的：建立H_2O_2誘導的小鼠TKE2細胞和角膜氧化應激的體內(nèi)外模型，通過添加ROCK抑制劑Y-27632，研究Y-27632對角膜上皮的保護性作用及其機制。 方法：（1）應用小鼠角膜上皮干/祖細胞系（TKE2）作為細胞模型，用無BPE(牛垂體提取物)的培養(yǎng)基處理2小時，而后用含Y-27632的培養(yǎng)基預干預2小時，再用200μM H_2O_2處理2小時，24小時后檢測細胞內(nèi)ROS（活性氧自由基）水平、細胞增殖以及NOX4、NRF2的表達情況；收集細胞提取mRNA，定量PCR檢測NRF2下游基因的表達情況；（2）選擇6-8周齡Balb/C小鼠，隨機分為4組，1組為對照組，另外3組采用5μl500μM H_2O_2角膜局部處理30分鐘，而后分別采用PBS（磷酸鹽緩沖液）、BSA（牛血清白蛋白）或Y-27632進行干預；一組4小時后取材，二組12小時后再次給予PBS、BSA或Y-27632干預，24小時后取材，分別行ROS、TUNEL、NOX4、NRF2的免疫熒光染色及H.E染色。 結果：Y-27632干預可以顯著抑制H_2O_2誘導的小鼠TKE2細胞和小鼠角膜的氧化應激反應，并呈現(xiàn)典型的時間效應。作用機制包括以下幾點：（1）Y-27632通過抑制H_2O_2誘導的NOX4的表達上調(diào)，降低了細胞在H_2O_2誘導下ROS水平的過度累積（；2）Y-27632抑制了H_2O_2誘導的NRF2通路的活化，以及下游HO-1、NQO-1、catalase等因子的過度表達，從而避免了NRF2信號通路過度活化引起的細胞應激反應。 結論：ROCK抑制劑Y-27632主要通過抑制NOX4表達和NRF2信號通路過度活化，降低細胞內(nèi)ROS水平，從而起到保護角膜上皮細胞的作用。
【學位授予單位】：濟南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R772.2

【參考文獻】

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1 董曉光,謝立信,張新晨,史偉云,李偉,袁風波;角膜中期保存液的研制和臨床應用[J];中華眼科雜志;2000年01期

本文編號：2787204