【摘要】：目的:研究氫氣水滴眼對(duì)堿燒傷誘導(dǎo)的大鼠角膜新生血管的抑制作用,通過檢測(cè)在氫氣水干預(yù)條件下角膜及房水組織中腫瘤壞死因子α和色素上皮衍生因子PEDF的變化,探討角膜病理性血管形成的相關(guān)機(jī)制。方法:1.選取SPF級(jí),6-8周齡,體重(180±20)g雄性SD大鼠,均將右眼作為實(shí)驗(yàn)眼。2.制作堿燒傷誘導(dǎo)的角膜新生血管模型,成功建立48眼,將其按隨機(jī)化原則進(jìn)行分組,分為陰性對(duì)照組、陽性對(duì)照組和治療組。3.陰性對(duì)照組給予生理鹽水滴眼,陽性對(duì)照組給予妥布霉素地塞米松眼液滴眼,治療組給予1.6PPM(part per million)氫氣水滴眼。均為每次一滴,每日四次,持續(xù)14天。4.在模型建立后,采用裂隙燈顯微鏡分別觀察第1天、第3天、第7天和第14天的角膜基本情況,拍照后使用Digimizer Image Analysis軟件測(cè)量并記錄新生血管長(zhǎng)度,計(jì)算新生血管生長(zhǎng)面積。5.在堿燒傷后第14天,水合氯醛腹腔麻醉,在無菌條件下取大鼠角膜組織并抽取房水。6.蘇木精-伊紅染色技術(shù)觀察角膜組織病理學(xué)變化;7.免疫組織化學(xué)染色技術(shù)檢測(cè)角膜組織色素上皮衍生因子PEDF蛋白表達(dá)。8.實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)角膜組織色素上皮衍生因子PEDF m RNA含量。9.酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)檢測(cè)房水內(nèi)腫瘤壞死因子TNF-α蛋白含量。結(jié)果:1.堿燒傷后第3、7天和14天,陰性對(duì)照組新生血管面積分別為(9.49±2.79)mm2、(17.71±4.06)mm2和(25.35±1.40)mm2;陽性對(duì)照組新生血管面積分別為(4.27±2.68)mm2、(6.44±4.67)mm2和(15.98±4.75)mm2;治療組新生血管面積分別為(3.26±1.82)mm2、(8.59±3.98)mm2和(3.24±2.34)mm2;在第3、7和14天,治療組和陽性對(duì)照組血管面積均小于陰性對(duì)照組,差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01);堿燒傷第3天,雖然治療組新生血管面積小于陽性對(duì)照組,但相差不大,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);堿燒傷第7天,雖然治療組血管面積大于陽性對(duì)照組,但相差仍然較小,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);在堿燒傷后第14天,治療組血管面積明顯小于陽性對(duì)照組,差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。2.堿燒傷第14天,HE常規(guī)染色及免疫組織化學(xué)染色結(jié)果提示:治療組角膜組織中PEDF蛋白表達(dá)較陽性對(duì)照組和陰性對(duì)照組明顯增強(qiáng),基質(zhì)層新生血管極少;3.堿燒傷第14天,實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果提示:治療組角膜組織中PEDF m RNA含量明顯高于陽性對(duì)照組和陰性對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01);4.堿燒傷第14天,酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定結(jié)果提示:治療組房水中TNF-α蛋白含量明顯低于陽性對(duì)照組與陰性對(duì)照組,差異均有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(均為P0.01)。結(jié)論:采用1.6 PPM氫氣水滴眼,能夠通過調(diào)控腫瘤壞死因子TNF-α,上調(diào)色素上皮衍生因子PEDF在眼內(nèi)的表達(dá),繼而有效抑制堿燒傷誘導(dǎo)的大鼠角膜新生血管。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R779.1
【圖文】：

生血管芽生長(zhǎng)，角膜呈灰白色渾濁，上皮部分融解缺損，基質(zhì)層水腫均可見皺褶，前房可見浮游物，但未見明顯積血，瞳孔視不清。堿燒傷后第 3 天，各組可見新生血管已出芽，并由周邊角膜緣向角陰性對(duì)照組中，可見血管生長(zhǎng)致密，長(zhǎng)而粗，較整齊，呈毛刷狀，相互暗紅，但未達(dá)角膜中央，累及面積達(dá)到 1/2，角膜基質(zhì)層水腫明顯，部分陽性對(duì)照組與治療組僅在血管床周圍發(fā)現(xiàn)局灶性血管芽，短而細(xì)，分布對(duì)照組中，有部分角膜上皮中央?yún)^(qū)出現(xiàn)大面積溶解脫落（圖 1）。堿燒傷后第 7 天，在陰性對(duì)照組中，毛細(xì)血管生長(zhǎng)達(dá)到高峰期，密集交織成網(wǎng)，角膜上皮缺失部分已基本愈合；陽性對(duì)照組與治療組血管生較細(xì)；治療組角膜上皮已逐漸透明；陽性對(duì)照組中角膜中央?yún)^(qū)仍可見溶堿燒傷后第 14 天，在陰性對(duì)照組中，毛細(xì)血管呈圓周生長(zhǎng)，已蔓粗大致密，全角膜呈瓷白色渾濁；陽性對(duì)照組可見血管床附近小血管有熟血管仍繼續(xù)向角膜中央生長(zhǎng)，累及面積達(dá) 1/2 以上，角膜中央?yún)^(qū)變薄療組中，血管床附近細(xì)小血管已基本退化，成熟血管短而細(xì)，分布稀疏漸透明（圖 3）。

圖 2 大鼠角膜堿燒傷第 7 天 CNV 照片。A 陰性對(duì)照組 B 陽性對(duì)照組 C 治療組A B C圖 3 大鼠角膜堿燒傷第 14 天 CNV 照片。A 陰性對(duì)照組 B 陽性對(duì)照組 C 治療組3.2 角膜新生血管面積計(jì)算結(jié)果堿燒傷后第 3、7 天和 14 天，陰性對(duì)照組新生血管面積分別為（9.4（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；陽性對(duì)照組新生血管面積2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治療組新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。

圖 3 大鼠角膜堿燒傷第 14 天 CNV 照片。A 陰性對(duì)照組 B 陽性對(duì)照組 C 治療組3.2 角膜新生血管面積計(jì)算結(jié)果堿燒傷后第 3、7 天和 14 天，陰性對(duì)照組新生血管面積分別為（9（17.71±4.06）mm2和（25.35±1.40）mm2；陽性對(duì)照組新生血管面積2.68）mm2、（6.44±4.67）mm2和（15.98±4.75）mm2；治療組新生血管面±1.82）mm2、（8.59±3.98）mm2和（3.24±2.34）mm2（表 1）。表 1 大鼠 角膜堿燒傷誘導(dǎo)不同時(shí)間點(diǎn) 3 組 CNV 面積（x分組 3d 7d 陰性對(duì)照組9.49±2.79 17.71±4.06 25.3陽性對(duì)照組4.27±2.68* 6.44±4.67* 15.9治療組3.26±1.82* 8.59±3.98* 3.2注：與陰性對(duì)照組相比，*P＜0.01；與陽性對(duì)照組相比，△P＜0.01

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 齊林嵩;張作明;張磊;;氫氣眼科醫(yī)學(xué)研究進(jìn)展[J];中華實(shí)驗(yàn)眼科雜志;2014年11期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 孫強(qiáng);氫氣生物學(xué)效應(yīng)系列研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2779409