發(fā)布時(shí)間：2020-06-03 16:12

【摘要】：目的:探討誘導(dǎo)缺血再灌注損傷(Retinal ischemia-reperfusion injury,RIRI)對(duì)大鼠視網(wǎng)膜硫化氫及相關(guān)酶的影響,深入研究青光眼缺血再灌注損傷的發(fā)病機(jī)制及為青光眼防治尋找新目標(biāo)及新靶向。方法:健康SD雄性大鼠80只,10周齡,300-350g。隨機(jī)將大鼠分為正常對(duì)照組(對(duì)照組)8只,視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷組(RIRI組)72只。在造模后1h,6h,12h,24h,48h,72h六個(gè)時(shí)間點(diǎn)分為6組,處死大鼠后,取出完整眼球,冰上去除角膜及晶狀體,剩余部分沿矢狀面分為兩部分:1/2病理學(xué)固定后檢測(cè);余1/2分離出視網(wǎng)膜,勻漿后通過(guò)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)測(cè)定(Enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)法檢測(cè)組織硫化氫含量,用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Quantitative realtime Polymerase Chain Reaction,q PCR)和蛋白免疫印跡法(Western Boltting,WB)檢測(cè)胱硫醚-β-合成酶(cystathionine-β-synthase,CBS),胱硫醚-γ-裂解酶(cystathionine-γ-lyase,CSE),半胱氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(Cysteine aminotranferase,CAT)及3-巰基丙酮酸硫基轉(zhuǎn)移酶(3-Mercaptopyruvate sulfurtransferase,3-MST)的m RNA和蛋白表達(dá)。結(jié)果:(1)病理檢測(cè)結(jié)果:RIRI后造成GCL層的病理?yè)p傷以先水腫后萎縮為主,對(duì)照組大鼠視網(wǎng)膜GCL層厚度為12.26±0.73μm;R1組為15.64±0.73μm,R6組為15.37±0.55μm,R12組為19.06±0.33μm,R24組為24.13±0.61μm,R48組為6.90±0.38μm,R72組為3.84±0.45μm。各組GCL層厚度較對(duì)照組均有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.00)。(2)對(duì)照組硫化氫含量為102.91±1.01 pg/ml,RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h各組分別是100.2±2.13pg/ml,72.5±1.35 pg/ml,99.04±2.05 pg/ml,79.52±1.01pg/ml,106.5±3.57 pg/ml,88.09±2.27 pg/ml。除1h(P=0.11)和48h(P=0.17)外,其余各組硫化氫含量較對(duì)照組下降(P=0.00)。(3)q PCR法測(cè)定大鼠視網(wǎng)膜CBS、CAT、CSE及3-MST的m RNA表達(dá):CBS組1h,6h,12h,24h,48h,72h分別為:0.10±0.02,0.11±0.01,0.35±0.08,1.00±0.02,0.09±0.04,0.15±0.05,顯著低于正常對(duì)照組(所有P=0.00)。CAT組分別為:0.23±0.02,0.50±0.08,0.27±0.06,0.15±0.01,0.14±0.03以及0.34±0.10,顯著低于正常對(duì)照組(所有P=0.00)。CSE組6.44±1.94,2.24±0.49,3.32±0.67,1.75±0.55,0.99±0.06,1.87±0.45。除24h(P=0.08)和48h外(P=0.70),其余各組各組表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(所有P0.05)。3-MST組分別為0.50±0.02,0.64±0.18,0.38±0.04,0.59±0.17,0.59±0.05,0.75±0.08,顯著低于正常對(duì)照組(所有P0.05)。(4)WB法檢測(cè)CBS,CSE,CAT及3-MST的蛋白表達(dá):RIRI后1h,6h,12h,24h,48h,72h CBS蛋白表達(dá)量分別是:0.07±0.01,0.18±0.01,0.04±0.01,0.09±0.13,1.00±0.01,0.38±0.06,顯著低于正常對(duì)照組(所有P=0.00)。CAT蛋白表達(dá)量分別是:0.34±0.04,0.15±0.02,0.38±0.03,0.51±0.06,0.09±0.00,0.42±0.06,顯著低于正常對(duì)照組(所有P=0.00)。CSE蛋白表達(dá)量分別是:0.45±0.04,0.21±0.02,0.16±0.02,0.10±0.02,0.06±0.01,0.05±0.01,顯著高于正常對(duì)照組(所有P0.05)。3-MST蛋白表達(dá)量分別是:0.70±0.01,0.69±0.08,0.08±0.01,0.13±0.01,0.22±0.02,0.32±0.06。除6h(P=0.17)外,其余各組蛋白表達(dá)顯著低于正常對(duì)照組(所有P0.05)。結(jié)論:(1)RIRI后病理結(jié)果顯示,GCL層先水腫,后變薄萎縮。在72小時(shí)內(nèi)視網(wǎng)膜隨時(shí)間延長(zhǎng)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、各層細(xì)胞丟失逐漸加重。(2)各組H2S含量較對(duì)照組均有不同程度的下降,其中下降最明顯的為6h組。(3)RIRI后大鼠視網(wǎng)膜上硫化氫含量以及CBS、CAT、3-MST含量均有不同程度下降,相反CSE表達(dá)增加。推測(cè)可能CBS、CAT、3-MST在RIRI后引起的硫化氫生成減少中起到主導(dǎo)作用。
【學(xué)位授予單位】：遵義醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R774.1

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 蔡冬梅;林書(shū)坡;蔣麗娟;胡健;肖華鳳;;替米沙坦對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠心肌ACE2表達(dá)的影響[J];山東醫(yī)藥;2009年20期

2 趙穎,牛膺筠,高云霞,周占宇,王紅云;Fas/FasL在視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷中的表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子的治療作用[J];中華眼底病雜志;2003年03期

3 牛膺筠,張瑞,周占宇,王紅云,劉夫玲;堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子對(duì)鼠視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷的治療作用[J];中華眼科雜志;2002年09期

4 楊新光,李健民;大鼠實(shí)驗(yàn)性高眼壓視網(wǎng)膜缺血再灌注損傷模型的建立及其機(jī)制[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2002年02期

，

本文編號(hào)：2695072