【摘要】：一、LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤中的表達目的:檢測IncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤組織及細胞中的表達。方法:qRT-PCR檢測21例視網(wǎng)膜母細胞瘤組織與瘤旁正常組織、視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞(Weri-Rb1、Y79)與正常視網(wǎng)膜色素上皮細胞(hTERT RPE-1)中l(wèi)ncRNA-MEG3 的表達。結果:視網(wǎng)膜母細胞瘤組織中IncRNA-MEG3的表達顯著低于瘤旁正常組織,Weri-Rb1、Y79細胞中IncRNA-MEG3的表達顯著低于hTERT RPE-1細胞。結論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤組織及細胞中均為低表達。二、LncRNA-MEG3對視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞功能的影響目的:檢測Weri-Rb1、Y79細胞中IncRNA-MEG3表達量對細胞功能的影響。方法:用 pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 轉染 Weri-Rb1 或 Y79 細胞后,CCK-8實驗及流式細胞儀檢測細胞增殖、凋亡能力。結果:轉染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1細胞增殖顯著減弱,凋亡顯著增加;轉染si-MEG3的Y79細胞增殖顯著增強,凋亡顯著降低。結論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤中發(fā)揮抑制細胞增殖、促進細胞凋亡的作用。三、視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài)對lncRNA-MEG3表達及細胞功能的影響目的:檢測視網(wǎng)膜母細胞瘤組織及細胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài),探討其與IncRNA-MEG3表達量及細胞功能之間的關系。方法:MS-PCR檢測21例視網(wǎng)膜母細胞瘤組織、瘤旁正常組織、Weri-Rb1、Y79細胞MEG3基因啟動子DNA甲基化狀態(tài)及IncRNA-MEG3表達量。5-Aza-CdR處理細胞后,檢測IncRNA-MEG3表達量、細胞增殖及凋亡能力。5-Aza-CdR和siRNA-MEG3共同干預后,檢測細胞增殖、凋亡能力。結果:視網(wǎng)膜母細胞瘤組織中MEG3基因啟動子DNA處于甲基化狀態(tài)的比例顯著高于瘤旁正常組織,甲基化組lncRNA-MEG3表達量顯著低于部分甲基化組及非甲基化組;Weri-Rb1、Y79細胞MEG3基因啟動子DNA處于甲基化狀態(tài);用5-Aza-CdR處理后,lncRNA-MEG3表達量顯著增高,細胞增殖顯著減弱,凋亡顯著增加;經(jīng)5-Aza-CdR和si-MEG3共同干預后,5-Aza-CdR抑制細胞增殖、促進細胞凋亡的能力均被逆轉。結論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤中低表達與MEG3基因啟動子DNA過甲基化有關。四、LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤中對Wnt/β-catenin信號通路活性的調控目的:探討在視網(wǎng)膜母細胞瘤中IncRNA-MEG3是否可通過調節(jié)Wnt/β-catenin信號通路活性而發(fā)揮作用。方法:用pcDNA-MEG3或si-MEG3轉染W(wǎng)eri-Rb1、Y79細胞后,用TOP-Flash reporter 實驗檢測 Wnt/β-catenin 信號通路活性,Western blot 實驗檢測β-catenin蛋白表達量;Wnt/β-catenin信號通路激活劑或拮抗劑與pcDNA-MEG3 或 si-MEG3 共同轉染 Weri-Rb1、Y79 細胞后,檢測 β-catenin 蛋白表達量、細胞增殖及凋亡能力。結果:轉染pcDNA-MEG3的Weri-Rb1細胞,熒光素酶活性、β-catenin蛋白表達量均顯著降低;轉染si-MEG3的Y79細胞,熒光素酶活性、β-catenin蛋白表達量均顯著增強;激活Wnt/β-catenin信號通路活性后,pcDNA-MEG3對Weri-Rb1細胞的抑癌作用被逆轉;抑制Wnt/β-catenin信號通路活性后,si-MEG3對Y79細胞的促癌作用被逆轉。結論:LncRNA-MEG3在視網(wǎng)膜母細胞瘤中可通過抑制Wnt/β-catenin信號通路活性而發(fā)揮作用。
【圖文】：

胞瘤組織及其相應的瘤旁正常視網(wǎng)膜組織中ｌｎＣＲＮＡ－ＭＥＧ３的表達水平，以逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ作為內參對照。實驗結果顯示ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３在視網(wǎng)膜母細胞瘤組織中逡逑的表達水平顯著低于瘤旁正常視網(wǎng)膜組織（Ｐ＜0．0５，圖１－１），表明在視網(wǎng)膜母逡逑細胞瘤組織中，，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３的表達水平較其相應瘤旁正常視網(wǎng)膜組織顯著逡逑降低，ｌｎｃＲＮＡ－ＭＥＧ３處于低表達狀態(tài)。逡逑ｃ邋１．５￣ｉ逡逑0逡逑0逡逑｜邋１．０－邐逡逑0逡逑Ｓ邐女逡逑ＬＵ邐Ｉ逡逑２邋０．５－逡逑＞逡逑0＞邐？蕾詹~枺歟眨闉靛義希危錚潁恚幔戾危裕酰恚錚蟈義賢跡保卞澹瘢遙裕校茫壹觳饈油つ趕赴鱟櫓捌湎嚶Φ牧讎哉Ｊ油ぷ櫓繡義希歟睿悖遙危粒停牛牽車謀澩鎪�。结果显示视网膜内s赴鱟櫓校歟睿悖遙危粒停牛牽車謀澩鎪藉義舷災陀諏讎哉Ｊ油ぷ櫓校煎澹埃埃�。辶x希疲椋紓澹保卞澹裕瑁邋澹澹穡潁澹螅螅椋錚鑠澹錚駑澹歟睿悖遙危粒停牛牽沖澹椋鑠澹潁澹簦椋睿錚猓歟幔螅簦錚恚徨澹簦椋螅螅酰澹澹簀澹幔睿溴澹簦瑁澹椋蟈義希悖錚潁潁澹螅穡錚睿洌椋睿玨澹幔洌輳幔悖澹睿翦澹睿錚睿簦酰恚錚蟈澹潁澹簦椋睿徨澹簦椋螅螅酰澹簀澹鰨澹潁邋澹洌澹簦澹悖簦澹溴澹猓澹瘢遙裕校茫遙澹裕瑁邋澹澹穡潁澹螅螅椋錚鑠義希常峰義

本文編號：2673323