【摘要】：摘要目的研究低能量激光療法(Low-level laser therapy,LLLT)對人Tenon囊成纖維細胞(human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)增殖遷移的影響;確定LLLT影響HTFs細胞增殖遷移的最適激光輻照參數(shù);探討低能量激光療法調(diào)控人Tenon囊成纖維細胞中胸腺素β4(thymosinβ4,Tβ4)的表達并影響成纖維細胞增殖遷移的機制。方法1.建立LLLT誘導的HTFs細胞株模型于白內(nèi)障超聲乳化手術(shù)中取人Tenon囊組織塊培育成纖維細胞,體外培養(yǎng)原代HTFs細胞,傳代后擇取生長良好的對數(shù)生長期HTFs細胞試驗。設(shè)置不同激光劑量組(0,0.5,1.0,2.0,5.0J/cm~2),未照射組作為對照組,采用CCK8法初步選出LLLT促進HTFs細胞生長活力的最適輻照劑量;設(shè)定相同激光劑量組,選用直徑分別為10mm和35mm的圓形均質(zhì)光斑進行激光照射,選出LLLT對HTFs細胞的最適輻照參數(shù)。2.檢測LLLT對HTFs細胞增殖、遷移作用的影響用不同劑量半導體激光分組照射成纖維細胞后,采用CCK-8法檢測LLLT對成纖維細胞增殖的影響;采取Transwell法、劃痕試驗檢測LLLT對人Tenon囊成纖維細胞遷移的影響;確定低能量半導體激光影響HTFs細胞增殖、遷移作用的最佳輻照度。3.檢測Tβ_4在LLLT誘導的HTFs細胞中的表達水平采用Western Blot和免疫熒光法來檢測Tβ4蛋白表達情況,以實時定量PCR檢測Tβ4mRNA的表達情況。結(jié)果1.成功培育HTFs細胞,細胞呈梭形,漩渦狀排列,與HTFs細胞形態(tài)相符。2.不同劑量的LLLT對HTFs細胞生長存在劑量依賴性,即在一定的激光輻照劑量范圍內(nèi)HTFs生長加速,且在2.0J/cm~2的LLLT輻照下HTFs細胞生長最快,與對照組相比,差異有統(tǒng)計學意義(P0.01);3.相同劑量的LLLT刺激下,不同光斑的大小對HTFs細胞生長活力有所不同;直徑為10mm圓形勻致光斑比35mm光斑輻照效果更佳。4.成功建立LLLT誘導的HTFs細胞株模型:低能量半導體激光照射系統(tǒng)功率密度設(shè)定為20mw/cm~2,光斑直徑為10mm,圓形勻致光斑。采用脈沖波照射模式,設(shè)定不同激光劑量分組:0J/cm~2(對照組);實驗組0.5J/cm~2(20mw/cm~2 25s);1.0J/cm2(20mw/cm~2 50s);2.0J/cm~2(20mw/cm~2 100s);5.0J/cm~2(20mw/cm~2 250s)。5.在CCK-8法和Transwell法、劃痕實驗中,表明用低強度半導體激光治療能促進HTFs的增殖和遷移;且LLLT促進HTFs的增殖和遷移的最適照射劑量為2.0J/cm~2,相比于對照組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.001)。6.Western Blot和免疫熒光實驗證實了LLLT對于Tβ4的表達具有調(diào)控作用,且該作用在照射劑量和時間上存在雙向依賴性,促進其活性的最佳照射劑量為2.0J/cm~2,相比于對照組(0J/cm~2)差異有顯著意義(P0.05)。此外實時定量PCR擴增得到單一產(chǎn)物,并且在2.0J/cm~2低能量半導體激光照射劑量下,Tβ4在轉(zhuǎn)錄水平的表達量明顯增強,差異有顯著意義(P0.05)。結(jié)論1.低能量半導體激光可促進人Tenon囊成纖維細胞增殖和遷移作用;2.胸腺素β4的激活可能與低能量半導體激光誘導成纖維細胞增殖和遷移作用存在一定的相關(guān)性;3.低能量半導體激光可能調(diào)控胸腺素β4參與人Tenon囊成纖維細胞的增殖與遷移。
【圖文】：

12A B圖 1-1A 正常對照組 HTFs 細胞，呈典型的梭形，胞體狹長, 較 LLLT 輻照組，，細胞為緩慢，3 天內(nèi)未能融合。圖 1-1B LLLT 輻照后 HTFs 細胞，細胞活性增強，生長致密，融合時細胞呈放射狀狀走行，單層生長，較對照組，細胞生長迅速，3 天后細胞生長致密達 80%以上融合

12A B圖 1-1A 正常對照組 HTFs 細胞，呈典型的梭形，胞體狹長, 較 LLLT 輻照組，細胞為緩慢，3 天內(nèi)未能融合。圖 1-1B LLLT 輻照后 HTFs 細胞，細胞活性增強，生長致密，融合時細胞呈放射狀狀走行，單層生長，較對照組，細胞生長迅速，3 天后細胞生長致密達 80%以上融合
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R779.6

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本文編號：2606496