本文關鍵詞：肽聚糖對實驗性自身免疫性葡萄膜炎輔助性T細胞17的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究目的 葡萄膜炎是一大類累及葡萄膜、視網(wǎng)膜、視網(wǎng)膜血管、視乳頭及玻璃體的眼病,常導致眼組織的嚴重破壞以致視功能的顯著下降或喪失。人類葡萄膜炎是一類種類繁多、病因復雜的疾病。雖然感染、外傷等多種因素均可引起葡萄膜炎,但多數(shù)觀點認為,自身免疫紊亂所致的葡萄膜炎為最常見和最重要的類型,其中輔助性T細胞17在自身免疫性葡萄膜炎的發(fā)病機制中起到重要作用。有研究發(fā)現(xiàn),TLRs與葡萄膜炎的的發(fā)生有關,并且只有TLR2基因與白塞氏病的易感性關系密切。在近年來研究發(fā)現(xiàn),Toll樣受體2在自身免疫性疾病的發(fā)病機制中起到關鍵的致病作用。本研究旨在探討肽聚糖作為Toll樣受體2的配體對樹突狀細胞分泌促炎性因子的影響,分析To11樣受體2對實驗性自身免疫性葡萄膜炎中輔助性T細胞17調(diào)控的機制,從而進一步闡明白身免疫性葡萄膜炎的發(fā)病機制。 方法 1、樹突狀細胞的培養(yǎng),鑒定C57BL/6小鼠骨髓樹突狀細胞(Dendritic cells, DCs)。 2、在小鼠骨髓細胞誘導樹突狀細胞分化的第6天將DCs分為對照組與實驗組,實驗組加入PGN刺激,對照組加入等量無菌磷酸緩沖鹽溶液,培養(yǎng)24h后利用實時熒光逆轉錄聚合酶鏈反應(RT-PCR)技術,檢測2組培養(yǎng)細胞中Th17細胞分化相關的細胞因子IL-23、腫瘤壞死因子(TNF)-α (TNF-α)、IL-6、IL-1β mRNA相對表達量。 3、建立EAU模型：利用光感受器間維生素A類結合蛋白(Interphotoreceptor retinoid-binding protein, IRBP)1-20多肽片段與含有結合分枝桿菌H37RA的弗氏完全佐劑(Complete Freund's adjuvant, CFA)等體積混合并充分乳化,單側后肢足墊和軀干部皮下注射,免疫C57BL/6小鼠。 4、分離IRBP1-20特異性T細胞并分別與兩組樹突狀細胞共培養(yǎng)：免疫13天分離EAU模型鼠脾臟和淋巴結的IRBPl-20特異的T細胞與經(jīng)PGN處理或未處理的樹突狀細胞共培養(yǎng),收集共培養(yǎng)后2d的IRBP1-20特異的T細胞,實時熒光RT-PCR檢測兩組維甲酸受體相關孤兒受體(ROR) γt (RORγt)、IL-17、T-bet、γ干擾素(IFN-γ)mRNA相對表達量； 5、收集共培養(yǎng)后2、5、7d的細胞分別進行流式細胞儀分析,觀察Th17、Thl細胞的變化。 6、將培養(yǎng)至第6天的DCs隨機分為對照組,PGN處理組PGN+SB203580組,并分別與IRBP1-20特異性T細胞共培養(yǎng),‘并于共培養(yǎng)的第7天,收集T細胞,流式細胞儀分析Th17和Th1的變化。 7、將培養(yǎng)至第6天的DCs加入PGN刺激后,分別于0min、15min、30min、1hr收集樹突狀細胞,western blot檢測p-p38。 結果 1、成功誘導純化并鑒定小鼠樹突狀細胞。 2、實時熒光RT-PCR檢測結果顯示,實驗組DCs經(jīng)PGN刺激后IL-23、IL-1βIL-6、TNF-α mRNA相對表達量較對照組顯著升高,差異有統(tǒng)計學意義(t=-14.363、-5.627、-3.85、-28.151; P0.05)。 3、實時熒光RT-PCR檢測結果顯示實驗組RORγt、IL-17mRNA相對表達量較對照組升高(t=-5.601、-19.76；P0.05),而T-bet、IFN-γ mRNA相對表達量變化不大。 4、流式細胞儀檢測結果顯示,與對照組相比,實驗組的DCs與T細胞共培養(yǎng)后2d、5d、7d, IL-17+細胞的百分比升高(t=-2.944、-3.03、-4.81; P0.05)而IFN γ+細胞的比例變化不大(t=-I.25,-0.18,-2.16;P0.05) 5、流式細胞儀檢測結果顯示,SB203580預處理組與單純PGN處理組相比,IL-17+細胞的百分比降低。封閉p38MAPK通路抑制了PGN對Th17細胞的促進作用。 6、western blot結果顯示經(jīng)PGN刺激后DCs表達p-p38增多。 結論 在體外,PGN能夠刺激DCs分泌IL-23、IL-1β、IL-6、TNF-α等與Th17細胞分化相關的細胞因子,促進EAU中Th17細胞的分化和增生。樹突狀細胞p38通路與PGN對Th17細胞的促進作用密切相關。
【關鍵詞】：實驗性自身免疫性葡萄膜炎 Toll樣受體2 抗原特異性T細胞 Thl7細胞 樹突狀細胞
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R773.9
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• ~.略語/符號說明11-12
• 前言12-18
• 研究現(xiàn)狀、成果12-15
• 研究目的、方法15-18
• 1.1 實驗動物與材料18-20
• 1.1.1 實驗動物18
• 1.1.2 實驗所用的主要儀器和設備18-19
• 1.1.3 主要試劑及溶液配制19-20
• 1.2 方法20-32
• 1.2.1 樹突狀細胞的培養(yǎng),鑒定C57BL/6小鼠骨髓樹突狀細胞20-21
• 1.2.2 樹突狀細胞的鑒定21
• 1.2.3 樹突狀細胞總RNA提取21-22
• 1.2.4 樹突狀細胞總RNA逆轉錄22
• 1.2.5 Quantitative real-time PCR(qPCR)實時定量PCR22-24
• 1.2.6 建立C57BL/6小鼠實驗性自身免疫性葡萄膜炎動物模型24
• 1.2.7 在免疫后的第6天,誘導培養(yǎng)樹突狀細胞24-25
• 1.2.8 分離IRBP1-20特異性T細胞25
• 1.2.9 IRBP1-20特異性T細胞與樹突狀細胞共培養(yǎng)25-26
• 1.2.10 實時定量RT-qPCR檢測共培養(yǎng)的T淋巴細胞基因變化26-27
• 1.2.11 流式細胞術分析Th1與Th17細胞的比例27
• 1.2.12 流式細胞儀分析p38抑制劑SB203580對Th17的影響27
• 1.2.13 western blot檢測P-P3827-32
• 1.2.14 統(tǒng)計學處理32
• 1.3 結果32-39
• 1.3.1 小鼠骨髓來源樹突狀細胞的培養(yǎng)與鑒定32
• 1.3.2 樹突狀細胞分泌細胞因子檢測結果32-34
• 1.3.3 實時定量RT-qPCR檢測共培養(yǎng)的T淋巴細胞基因變化34-35
• 1.3.4 流式細胞儀檢測共培養(yǎng)的T淋巴細胞中Th1與Th17細胞的比例35-37
• 1.3.5 抑制p38使Th17細胞下調(diào)37-38
• 1.3.6 western blot檢測經(jīng)PGN刺激后樹突狀細胞中P-P38的表達情況38-39
• 1.4 討論39-43
• 結論43-44
• 參考文獻44-49
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明49-50
• 綜述50-66
• 綜述參考文獻58-66
• 致謝66

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馮振華;王大博;韓靜;孫娟;;葡萄膜炎患者血清淀粉樣蛋白A的測定及臨床意義[J];眼科新進展;2010年02期

2 龔文容;陳震;邢怡橋;;輔助性T細胞17和實驗性自身免疫性葡萄膜炎[J];華西醫(yī)學;2011年02期

3 唐紅;徐皓;劉娟;;葡萄膜炎患者外周血單個核細胞分泌細胞因子的研究[J];國際眼科雜志;2011年05期

4 陳浩;李勇;盛迅倫;;葡萄膜炎232例臨床病例分析[J];寧夏醫(yī)學雜志;2011年06期

5 樊偉英;李健;李明新;牟莉;;葡萄膜炎的臨床分析[J];臨床眼科雜志;2012年04期

6 高洪瑞,周韻秋,周浩;L-硝基精氨酸甲酯對實驗性葡萄膜炎的影響[J];第二軍醫(yī)大學學報;2000年03期

7 劉曉峰;中西醫(yī)結合治療葡萄膜炎的臨床研究進展[J];河南中醫(yī)藥學刊;2000年06期

8 蔡民眾,莊銘忠;中西醫(yī)結合治療葡萄膜炎18眼療效觀察[J];福建醫(yī)藥雜志;2001年04期

9 徐小平,黃蘭;復發(fā)性葡萄膜炎患者免疫復合物測定及意義[J];眼科新進展;2001年03期

10 喬治,閔磊,張梁海;葡萄膜炎患者外周血單核細胞表達的疾病相關細胞因子的檢測[J];武漢大學學報(理學版);2002年06期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 阮克奮;;葡萄膜炎中西醫(yī)治療再探討——復發(fā)性葡萄膜炎的治療[A];浙江省中西醫(yī)結合學會眼科專業(yè)委員會第八次學術年會暨省級繼續(xù)教育學習班資料匯編[C];2005年

2 華峰;;葡萄膜炎患者血糖測定及意義[A];2007年浙江省眼科學術會議論文集[C];2007年

3 侯習武;魏麗萍;王宇冉;劉向前;孫利娜;;葡萄膜炎治療的臨床觀察[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

4 鐘良玉;盧輝;;中西醫(yī)結合治療葡萄膜炎的臨床觀察[A];浙江省中醫(yī)藥學會第二屆“之江中醫(yī)藥論壇”暨2012年學術年會文集[C];2012年

5 劉靜霞;;葡萄膜炎的中西醫(yī)防治研究[A];中華中醫(yī)藥學會第五次眼科學術交流會論文匯編[C];2006年

6 鐘新娜;曹岐新;吳元奇;;中西醫(yī)結合治療葡萄膜炎臨床研究[A];浙江省中醫(yī)藥學會眼科分會2008繼續(xù)教育研討會論文集[C];2008年

7 林柳燕;郝小波;孔秀蓮;張亞飛;龔輝珍;;藥物導入治療葡萄膜炎的療效觀察[A];第六屆全國中醫(yī)中西醫(yī)結合眼科學術交流會論文匯編[C];2007年

8 史晉霞;李茹;賈園;栗占國;;原發(fā)性免疫性葡萄膜炎五例臨床分析[A];第十二屆全國風濕病學學術會議論文集[C];2007年

9 楊培增;;糖皮質(zhì)激素治療葡萄膜炎的基本原則[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

10 楊培增;;葡萄膜炎的診斷流程和治療概要[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 時仲省;專家提醒：激素治療葡萄膜炎不能過量[N];中國醫(yī)藥報;2012年

2 鄭州大學第四附屬醫(yī)院眼一科教授 侯習武 整理 時仲省;治葡萄膜炎激素別超量[N];健康報;2013年

3 本報記者 魏鑫;別怕 激素葡萄膜炎能治愈[N];保健時報;2005年

4 記者 涂端玉 通訊員 陳景榮　;葡萄膜炎，莫等閑視之[N];廣州日報;2005年

5 方彤;全程觀察治療葡萄膜炎[N];健康報;2005年

6 陳剛 侯習武 時仲省 馮光耀;悄悄致盲的葡萄膜炎[N];健康報;2005年

7 印高樂;眼葡萄膜炎治療有新法[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

8 張荔子;揭秘葡萄膜炎[N];健康報;2006年

9 張鴻茜;悄悄致盲的葡萄膜炎[N];醫(yī)藥養(yǎng)生保健報;2006年

10 重慶醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院眼科教授 楊培增　本報記者 魏平 整理;葡萄膜炎：診斷細化流程 治療激素當先[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2011年

中國博士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 毛羽;結核性后葡萄膜炎臨床特征及診斷的研究[D];首都醫(yī)科大學;2014年

2 李光達;間充質(zhì)干細胞治療大鼠自身免疫性葡萄膜炎作用機制的研究[D];天津醫(yī)科大學;2012年

3 吳文婷;IL-17RC低甲基化影響葡萄膜炎的機制研究及中藥治療葡萄膜炎的臨床體會[D];北京中醫(yī)藥大學;2014年

4 王昕;應用蛋白質(zhì)組學技術建立Behcet病相關葡萄膜炎診斷模型并篩選血清學標記物[D];北京協(xié)和醫(yī)學院;2010年

5 黃春健;Granzyme B基因轉錄調(diào)控機制的研究及perforin/granzyme B通路在實驗性自身免疫性葡萄膜炎的致病機制中作用的研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2006年

6 顧國貞;阿瓦斯�。ˋvastin）和曲安奈德（TA）對兔眼葡萄膜炎治療的療效觀察[D];吉林大學;2009年

7 吳亞娣;Th1細胞在實驗性自身免疫性葡萄膜炎中的致病性研究和Triptolide誘導T淋巴細胞凋亡的機制研究[D];中國科學院研究生院（上海生命科學研究院）;2003年

8 秦廷玉;難治性眼底病中炎癥細胞因子產(chǎn)生的機制研究[D];重慶醫(yī)科大學;2012年

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李昕;葡萄膜炎的臨床和血清免疫學研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

2 解傳奇;骨髓間充質(zhì)干細胞干預實驗性自身性免疫性葡萄膜炎的研究[D];山西醫(yī)科大學;2009年

3 李穎穎;中西醫(yī)結合治療葡萄膜炎的臨床觀察[D];遼寧中醫(yī)藥大學;2007年

4 高璐;環(huán)孢素聯(lián)合中藥治療難治性葡萄膜炎的臨床研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學;2010年

5 胡燃燃;TLRs基因多態(tài)與葡萄膜炎遺傳易感性研究[D];重慶醫(yī)科大學;2013年

6 荊梅華;強直性脊柱炎并發(fā)葡萄膜炎臨床特點的研究[D];揚州大學;2014年

7 喬玉好;葡萄膜炎的臨床流行病學和免疫學研究[D];天津醫(yī)科大學;2014年

8 原莉莉;誘導免疫耐受治療實驗性自身免疫性葡萄膜炎[D];天津醫(yī)科大學;2005年

9 楊白冰;環(huán)孢素聯(lián)合糖皮質(zhì)激素治療特發(fā)性全葡萄膜炎的臨床應用研究[D];鄭州大學;2011年

10 劉姣;葡萄膜炎患者心理狀況，視力以及健康相關生活質(zhì)量研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

  本文關鍵詞：肽聚糖對實驗性自身免疫性葡萄膜炎輔助性T細胞17的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：254533