紫杉醇聚乳酸微球抑制青光眼術后濾過泡瘢痕的實驗研究

發(fā)布時間：2019-07-15 18:02

【摘要】：目的:探討紫杉醇聚乳酸微球在兔小梁切除術后抗增殖作用的效果及其安全性評價。方法:①采用高效液相色譜(HPLC)法測定紫杉醇聚乳酸微球在房水中的釋放時間,觀察其在房水中的緩釋作用。②將健康成年家兔48只構建青光眼濾過手術動物模型,隨機分為4組:空白對照組、標準對照組、實驗Ⅰ組及實驗Ⅱ組,均行右眼標準小梁切除術;術前對實驗Ⅱ組行F-ERG檢查眼底情況,并對各組的角膜、結膜、前房、晶體、眼底、眼壓等進行檢查以排除眼部疾患。術中在手術部位的鞏膜瓣下各組對應不用藥、用0.3mg/ml絲裂霉素C(MMC)及0.3mg/ml紫杉醇5min,及在實驗Ⅱ組的結膜與鞏膜之間放置2.5mg紫杉醇聚乳酸微球。③濾過泡按Kronfeld標準分型[1]。比較術后第7、21、35、49天各組功能型濾過泡的數(shù)量。④測量術前及術后第7、21、35、49天各組眼壓并記錄數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析,比較各組在各時間點的眼壓有無差異。⑤組織病理學:術后第21、35、49天各組均隨機取四只兔子,摘除已做手術眼球,取濾過泡及其周圍角鞏膜組織,固定,制成石蠟切片,做蘇木精—伊紅(HE)染色,光鏡下觀察濾過道開放情況及炎性細胞數(shù)量;做免疫組化增殖細胞核抗原(PCNA)染色,觀察成纖維細胞的增殖情況;做Masson三色染色觀察濾過道新生膠原纖維的增殖情況。⑥術后用裂隙燈檢查各組可能出現(xiàn)的并發(fā)癥:結膜傷口漏、角膜上皮點狀脫落、淺前房、前房炎癥反應、晶體混濁、薄壁濾過泡等;用間接眼底鏡觀察有無眼底損害。⑦紫杉醇聚乳酸微球的安全性評價:將12只兔子于術后第7、21、35、49天均進行裂隙燈顯微鏡檢查,觀察有無結膜傷口漏、角膜上皮點狀脫落、淺前房、前房炎癥反應等并發(fā)癥,用間接眼底鏡檢查眼底情況,觀察紫杉醇聚乳酸微球對眼內組織的安全性;分別于術前及術后第7、21、35、49天行角膜內皮鏡檢查及F-ERG檢查,分別觀察紫杉醇聚乳酸微球對角膜內皮細胞、視網膜的毒副作用;并于術后第49天將兔子處死,取手術部位對應的角膜、房角、晶體前囊膜組織行透射電鏡檢查,觀察紫杉醇聚乳酸微球對角膜內皮細胞、房角小梁網內皮細胞及晶體上皮細胞的影響。結果:①房水中藥物含量測定表明紫杉醇聚乳酸微球有明顯的緩釋作用,體內藥物濃度能在較長時間內維持較高水平;②術后第7天各組功能型濾過泡的數(shù)量基本相同;術后第21、35、49天空白對照組功能型濾過泡的數(shù)量均是四組中最低的,標準對照組與實驗Ⅰ組功能型濾過泡的數(shù)量無顯著差別;實驗Ⅱ組在術后各時間點功能型濾過泡數(shù)量明顯多于其他三組;③術后第7天四組眼壓基本相同(P0.05);實驗Ⅱ組術后各時間點的眼壓均低于其他三組(P0.05);標準對照組與實驗Ⅰ組術后各時間點的眼壓基本相同(P0.05),無顯著差異;術后第21、35、49天空白對照組眼壓均較其他三組高(P0.05),有顯著差異;④術后第7天四組組織病理學無顯著差異;術后第21、35、49天實驗Ⅱ組HE染色顯示大部分濾過道開放情況良好,炎性細胞數(shù)量較少,PCNA染色顯示成纖維細胞增殖數(shù)量及Masson三色染色顯示新生膠原纖維增殖數(shù)量均較其他三組少;而從術后各時間點HE染色、PCNA免疫組化染色、Masson三色染色結果來看,標準對照組與實驗Ⅰ組的抗增殖效果無顯著差異,隨著時間的發(fā)展,濾過道中增殖的細胞與纖維逐漸增多;術后第21天空白對照組濾過道的增殖情況較其他三組出現(xiàn)差別,且隨著時間的推移,這種差別越來越明顯,濾過道在術后第49天已被完全堵塞。⑤術后并發(fā)癥:標準對照組有兔眼出現(xiàn)結膜傷口漏和淺前房的現(xiàn)象;標準對照組與實驗Ⅰ組分別有兔眼出現(xiàn)角膜上皮點狀脫落及薄壁濾過泡現(xiàn)象,這些并發(fā)癥經過幾天后均愈合,并未發(fā)現(xiàn)異常。而術后標準對照組有兔眼出現(xiàn)晶體輕微混濁現(xiàn)象。術后空白對照組的前房炎癥反應較重,易出現(xiàn)淺前房;而實驗Ⅱ組在術后各時間點前房炎癥反應均較其他三組輕。⑥紫杉醇聚乳酸微球的安全性評價結果:裂隙燈檢查:紫杉醇聚乳酸微球對眼內組織未產生明顯的并發(fā)癥;眼底檢查也未發(fā)現(xiàn)異常;術后F-ERG檢查顯示視網膜電流圖潛時及波幅較術前無明顯改變;角膜內皮細胞鏡檢查顯示紫杉醇聚乳酸微球未使內皮細胞密度和細胞面積變異系數(shù)的指標發(fā)生明顯改變;透射電鏡結果顯示,與對照眼相比,紫杉醇聚乳酸微球對角膜內皮細胞、房角小梁網內皮細胞、晶體上皮細胞無明顯的毒副作用。而紫杉醇聚乳酸微球在應用于手術之前經過60Co輻射滅菌,達到了無菌手術的要求,可應用于手術中。結論:本研究制備的紫杉醇聚乳酸微球在房水中的藥物濃度能在較長時間內維持較高水平,具有明顯的緩釋作用;生物相容性良好,無明顯的毒副作用;術中在手術部位結膜和鞏膜之間植入可有效抑制炎性細胞、成纖維細胞及新生膠原纖維的增殖,有助于功能型濾過泡的形成,保持濾過道的通暢,有效地降低眼壓;同時,其應用于眼部,具有一定的安全性,不會對眼內組織產生危害。因此,紫杉醇聚乳酸微球有望成為青光眼濾過術后抗增殖的一種新的輔助藥物。
文內圖片：紫杉醇對照品HPLC圖譜

圖片說明： 1163.436紫杉醇標準曲線圖y = 3.3647x - 4.3147R2= 0.99980204060801001201401601800 10 20 30 40 50 60濃度C（μg/ml）面積（×峰0）1圖 1 紫杉醇標準曲線圖2.3 色譜行為紫杉醇對照品溶液，空白房水，紫杉醇聚乳酸微球在房水中的高效液相色譜圖顯示：紫杉醇原料藥的保留時間為 15.98h (如圖 2)，紫杉醇聚乳酸微球在房水中的保留時間為 15.92h (如圖 3)，而空白房水中在 15.90h 左右沒有峰 (如圖 4)。因此，，可知房水中的內源性雜質、其它代謝物或雜質等，對紫杉醇的測定沒有干擾。
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