【摘要】： [研究背景]真菌性角膜炎是嚴(yán)重的致盲性眼病,如不能及時(shí)的診斷和治療將導(dǎo)致角膜穿孔、失明甚至眼球摘除。近年來(lái)真菌性角膜炎的發(fā)病率明顯上升,其中鐮刀菌和曲霉菌是最主要的致病菌。 在角膜細(xì)胞的固有免疫反應(yīng)中,Toll樣受體(TLR)通過(guò)識(shí)別不同的病原相關(guān)分子模式(PAMP)起重要作用。TLR4能夠識(shí)別革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁的主要成分—脂多糖(LPS)。我們前期研究發(fā)現(xiàn)TLR2和TLR4能夠識(shí)別煙曲霉菌(AF)的PAMP,誘導(dǎo)炎性因子表達(dá),趨化多型核中性粒細(xì)胞(PMN)向感染灶遷移。 目前,TLR的配體預(yù)處理引起對(duì)病原體刺激的耐受反應(yīng)的研究是當(dāng)前抗感染研究的熱點(diǎn)方向之一。TLR的配體預(yù)處理引起的耐受反應(yīng)不僅僅是一種低反應(yīng)性免疫狀態(tài),還是一個(gè)功能轉(zhuǎn)換過(guò)程,這種耐受表型是“細(xì)胞再編程”的結(jié)果。 [目的]探討小劑量LPS預(yù)處理能否引起角膜對(duì)真菌刺激的細(xì)胞再編程,從而調(diào)控角膜細(xì)胞抗感染的固有免疫反應(yīng)。 [方法]LPS分別刺激人永生化角膜上皮細(xì)胞(THCE)和人永生化角膜基質(zhì)細(xì)胞(THSF), ELISA法檢測(cè)培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子TNF-α、IL-8和IL-6的分泌。小劑量LPS刺激THSF一定時(shí)間后再給予大劑量LPS或AF刺激,1h后收集細(xì)胞,實(shí)時(shí)RT-PCR檢測(cè)LPS預(yù)處理THSF對(duì)LPS或AF引起細(xì)胞因子及抗菌肽mRNA表達(dá)的影響；4h后收集細(xì)胞上清,ELISA檢測(cè)LPS預(yù)處理對(duì)LPS或AF引起細(xì)胞因子及抗菌肽分泌的影響。小劑量LPS預(yù)處理THSF一定時(shí)間后,給予大劑量LPS或AF刺激4h,收集細(xì)胞上清,24孔Transwell小室檢測(cè)LPS預(yù)處理對(duì)PMN遷移的影響。 [結(jié)果] 1.角膜細(xì)胞細(xì)胞因子的分泌：與對(duì)照組比較,LPS刺激THCE未明顯增加IL-8的分泌；AF刺激THCE增加IL-8的分泌,其分泌量達(dá)對(duì)照組的12倍。與對(duì)照組比較,LPS刺激可引起THSF的IL-8分泌的增加,其分泌量隨刺激時(shí)間延長(zhǎng)而上升；TNF-α的分泌未見(jiàn)明顯改變。 2.預(yù)處理角膜細(xì)胞對(duì)再次刺激引起的細(xì)胞因子產(chǎn)生的影響：與對(duì)照組比較,小劑量LPS預(yù)處理THSF可抑制大劑量LPS或AF誘導(dǎo)的炎性細(xì)胞因子在基因和蛋白水平的表達(dá)。 3.LPS預(yù)處理對(duì)再次刺激引起的抗菌肽表達(dá)的影響：LPS刺激實(shí)驗(yàn)中,小劑量LPS預(yù)處理THSF一定時(shí)間后再用大劑量LPS刺激,抗菌肽CCL20的表達(dá)較單純用大劑量LPS刺激顯著增加,而LL-37表達(dá)的無(wú)明顯改變。AF刺激實(shí)驗(yàn)中,小劑量LPS預(yù)處理THSF一定時(shí)間后再用大劑量AF刺激,抗菌肽CCL20和Tβ4mRNA的表達(dá)較對(duì)照組顯著增加。 4.LPS預(yù)處理對(duì)PMN遷移的影響：小劑量LPS預(yù)處理一定時(shí)間抑制大劑量LPS或AF誘導(dǎo)的PMN向THSF的遷移。 [結(jié)論]本研究發(fā)現(xiàn)小劑量脂多糖預(yù)處理可抑制大劑量脂多糖或煙曲霉菌刺激引起的角膜細(xì)胞炎性反應(yīng),增加抗感染的能力,主要表現(xiàn)為炎性細(xì)胞因子表達(dá)減少、抗菌肽表達(dá)增加及PMN的遷移受到抑制。這表明角膜細(xì)胞再編程的誘導(dǎo)可能為預(yù)防和控制真菌性角膜感染提供新的方法。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R772.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 高建魯,吳欣怡;Toll樣受體在人眼角膜上皮和永生化人角膜上皮細(xì)胞系的表達(dá)及功能研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2005年32期

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本文編號(hào)：2445469