【摘要】：目的：晶狀體在整個發(fā)育過程處于低氧分壓狀態(tài),這可能導致晶狀體上皮細胞自身表達VEGF。晶狀體上皮細胞表達VEGF可能與玻璃體血管的形成有關,同時亦可通過自分泌或旁分泌作用影響晶狀體本身的生長和分化。已有大量研究表明VEGF對多種來源的干細胞具有促進分化及保持存活的作用。晶狀體上皮細胞的生發(fā)區(qū)存在有干細胞/祖細胞樣細胞。VEGF對于晶狀體干細胞樣細胞發(fā)育及分化的影響仍未見相關報道。在高氧分壓下,細胞VEGF的表達會有所下降。因此通過對新生仔鼠高氧環(huán)境下飼養(yǎng),觀察高氧條件下,晶狀體VEGF表達量的變化,以及與干細胞標記物表達的相關性,初步探討VEGF對晶狀體上皮細胞中干細胞樣細胞分化及發(fā)育的可能影響,并為先天性白內(nèi)障及后發(fā)性白內(nèi)障發(fā)生機理及預防治療提供一個新的思路。 方法：1、將出生后第2天(postnatal, P1.5)仔鼠于75%高氧分壓下飼養(yǎng),分別于P3.5,P8.5取眼球。觀察高氧條件下仔鼠晶狀體形態(tài)學改變,組織學變化,并通過透射電子顯微鏡觀察晶狀體上皮細胞超微結構的變化。2、取上述時間點仔鼠晶狀體,行免疫組化和熒光定量PCR檢測,觀察不同時間點高氧條件對仔鼠晶狀體上皮細胞VEGF和Nestin的影響,分析干細胞特性的改變以及與VEGF的關系。3、觀察高氧條件對仔鼠晶狀體上皮細胞增殖的影響。取上述時間點仔鼠晶狀體,行熒光定量PCR檢測不同時間點高氧分壓對于晶狀體細胞PCNA mRNA轉錄的影響。使用免疫組化觀察PCNA、BrdU的染色變化,以進一步分析增殖能力的變化。使用細胞核DAPI染色,初步觀察上皮細胞凋亡的變化情況。 結果：1、高氧分壓對仔鼠晶狀體的發(fā)育可以產(chǎn)生影響。P3.5時,仔鼠晶狀體高氧組和對照組在形態(tài)學上無顯著差異。P8.5時,晶狀體的水平直徑與對照無統(tǒng)計學差異,但是高氧分壓使晶狀體變薄,并且混濁率增加。P3.5時,高氧組和對照組仔鼠晶狀體組織學上無明顯差異。P8.5時,可見對照組前囊下上皮細胞為單層細胞,細胞核為橫橢圓形,排列規(guī)則,而高氧組前囊下上皮細胞多為單層細胞,細胞核為圓形或不規(guī)則形,且細胞排列不整齊。對照組赤道部上皮細胞多為單層,偶見復層細胞,可能為生發(fā)區(qū),細胞核前部為圓形,向后逐漸過渡為梭形。而高氧組赤道部復層細胞比對照組增多,細胞核亦自前部圓形向后逐漸過渡為梭形。透射電子顯微鏡顯示高氧組P8.5時囊膜缺失。2、高氧分壓可使仔鼠晶狀體上皮細胞中VEGF的表達下降、Nestin表達增加。P3.5和P8.5時,高氧組仔鼠晶狀體中VEGF mRNA的轉錄水平比對照均顯著下降,免疫組化可見P3.5時高氧組晶狀體上皮細胞VEGF表達較對照減弱。PCR和免疫組化表明,P3.5時高氧組仔鼠晶狀體中Nestin的表達與對照無明顯差異,而P8.5時高氧組比對照組增強。3、高氧分壓條件可以促使仔鼠晶狀體上皮細胞增殖能力增強。PCR和免疫組化均可見P3.5和P8.5時,高氧組仔鼠晶狀體中PCNA的表達較對照組增強。同時在P3.5和P8.5時,高氧組仔鼠晶狀體上皮細胞BrdU染色均對照組顯著增強。DAPI核染色顯示高氧組和對照組在兩個時間點均可見赤道部凋亡的細胞核。 結論：高氧分壓可使仔鼠晶狀體體積減小,這可能與晶狀體上皮細胞合成晶狀體蛋白減少有關。而晶狀體囊膜消失可能與晶狀體上皮細胞合成的膠原蛋白異常或合成了特殊的膠原蛋白水解酶有關。同時晶狀體上皮細胞中VEGF表達減少,而干細胞特性增強,細胞增殖能力增強。這亦反映了晶狀體上皮細胞成熟的延遲或減慢。而既往文獻報道VEGF可促進培養(yǎng)的人晶狀體上皮細胞增殖能力增強,這可能與實驗條件不同或在體條件下,高氧可誘發(fā)其他途徑促進晶狀體上皮細胞增殖有關。本研究對晶狀體上皮細胞分化成熟的可能機制進行了初步的探討,并為進一步研究白內(nèi)障的發(fā)生機制提供了初步的理論依據(jù)。本研究可為防治白內(nèi)障及后發(fā)性白內(nèi)障提供一定的理論基礎。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R776

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 陳忠,陳旭,戴麗,胡驍驊,孫永華;高氧平衡鹽溶液對SARS患者治療作用[J];中國醫(yī)刊;2004年04期

2 黃立鋒,賈赤宇,謝曉繁;家兔吸入性損傷早期應用高氧平衡鹽溶液的觀察[J];中華燒傷雜志;2005年03期

3 全裕鳳,常立文,張國風,馬麗亞;重組人類促紅細胞生成素對早產(chǎn)大鼠高氧肺損傷的影響[J];中國當代兒科雜志;2001年05期

4 張向峰,梁瑛,Hussein D.Foda;高氧所致小鼠急性肺損傷時一氧化氮合成酶的表達(英文)[J];中華急診醫(yī)學雜志;2004年06期

5 劉成軍,許峰,匡鳳梧,黨潤,盧仲毅,王興勇;基質金屬蛋白酶及其組織抑制劑在高氧性肺損傷中的變化[J];實用兒科臨床雜志;2004年10期

6 李文斌,常立文,祝華平,容志惠;高氧、維甲酸對胎鼠肺成纖維細胞c-Jun、c-Fos表達的影響[J];華中科技大學學報(醫(yī)學版);2003年02期

7 孫永華,胡驍驊,陳忠,程安源,鐘穗航;高氧復方氯化鈉溶液用于大鼠燒傷后休克的觀察[J];中華燒傷雜志;2003年S1期

8 黃立鋒,賈赤宇,謝曉繁;高氧平衡鹽溶液對家兔吸入性損傷肺功能相關數(shù)據(jù)的影響[J];中國臨床康復;2005年10期

9 王柏川;葉劍;;晶狀體蛋白的翻譯后修飾[J];眼科研究;2007年06期

10 陳紅兵,常立文,劉漢楚,容志惠,祝華平,張謙慎,李文斌;血小板源性生長因子對新生大鼠高氧肺損傷的影響[J];實用兒科臨床雜志;2005年02期

相關會議論文 前10條

1 張婕;嚴宏;Harding JJ;劉震雄;王新;;首先被氨甲�；舻木铙w蛋白質的分離和鑒定[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

2 岳少杰;湯飛鴿;羅自強;馮德云;;MK-801對新生大鼠高氧肺損傷的保護作用[A];第十一次全國中西醫(yī)結合兒科學術會議論文匯編[C];2004年

3 董君艷;王力光;;犬白內(nèi)障的臨床分類及病理特性[A];第十三次全國養(yǎng)犬學術研討會論文集[C];2009年

4 王永強;嚴宏;;早期被地塞米松攻擊的晶狀體蛋白質的分離與鑒定[A];中華醫(yī)學會第十二屆全國眼科學術大會論文匯編[C];2007年

5 王文軍;唐羅生;;不同生長期晶狀體蛋白對大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細胞存活的影響[A];中國眼底病論壇·全國眼底病專題學術研討會論文匯編[C];2008年

6 申屠形超;姚克;;突變型γD-晶狀體基因蛋白模型的計算機構建和分析[A];2005年浙江省眼科學術會議論文集[C];2005年

7 黨潤;許峰;匡鳳悟;盧仲毅;王興勇;;高氧致肺損傷大鼠TGF-β_1和MMPs基因表達的變化[A];2004年全國危重病急救醫(yī)學學術會議論文集[C];2004年

8 申屠形超;姚克;;突變型晶狀體基因蛋白模型的計算機構建和分析[A];2006年浙江省眼科學術會議論文集[C];2006年

9 孫永華;胡驍驊;陳忠;;高氧晶體溶液防治燒傷休克作用的研究[A];中華醫(yī)學會第六屆全國燒傷外科學術會議論文匯編[C];2001年

10 田兆方;杜江;王斌;洪小楊;封志純;;高氧對新生大鼠肺組織Cx26表達的影響[A];全國圍產(chǎn)醫(yī)學專題學術研討會論文匯編[C];2007年

相關重要報紙文章 前10條

1 朱立明;白內(nèi)障藥物防治現(xiàn)曙光[N];中國醫(yī)藥報;2003年

2 劉永平邋鄭義;我國白內(nèi)障發(fā)病機理研究獲重大進展[N];中國醫(yī)藥報;2008年

3 ;高氧復方溶液治缺氧性損傷[N];中國醫(yī)藥報;2004年

4 第四軍醫(yī)大學唐都醫(yī)院眼科教授 嚴宏邋劉永平 鄭義 整理;從發(fā)病機理探尋白內(nèi)障藥療[N];健康報;2008年

5 楊志臣 杜萍;提高氧氣利用效率新途徑[N];中國冶金報;2003年

6 廣州空軍醫(yī)院眼科主任醫(yī)師 景連喜;治療白內(nèi)障的新進展[N];廣東科技報;2006年

7 武漢市第八醫(yī)院藥劑科 曹霞;多種藥物可延緩白內(nèi)障進程[N];大眾衛(wèi)生報;2006年

8 洪志勇;葡萄糖與人的衰老[N];健康報;2002年

9 上海大學教授 鄧偉志;“低碳生活”與“高氧經(jīng)濟”[N];北京日報;2010年

10 王蘭;濃縮氧縮短植物成熟期[N];大眾科技報;2002年

相關博士學位論文 前10條

1 龍?zhí)?高氧及血管內(nèi)皮生長因子對晶狀體發(fā)育的影響[D];武漢大學;2013年

2 竺向佳;人晶狀體細胞膜流動性的年齡相關性改變及可溶性晶狀體蛋白的調節(jié)作用[D];復旦大學;2010年

3 單瑞艷;硫氧還蛋白對高氧肺損傷保護作用的機制研究[D];華中科技大學;2011年

4 崔蓓;TPCK對大鼠晶狀體混濁的影響及機制的研究[D];第二軍醫(yī)大學;2012年

5 姬芳玲;人眼γD晶狀體蛋白致病突變體生物物理化學性質及結構的研究[D];大連理工大學;2013年

6 陳強;一個遺傳性白內(nèi)障家系致病基因的突變檢測及其致病機制研究[D];武漢大學;2010年

7 趙永清;非洲爪蟾晶狀體發(fā)育與再生過程中αA-,βB1-晶狀體蛋白的表達[D];蘭州大學;2011年

8 高茜;βγ-晶狀體蛋白與三葉因子復合物生物化學特性與作用機制研究[D];中國科學技術大學;2011年

9 敖曉曉;血管活性腸肽對高氧損傷肺泡Ⅱ型上皮細胞再生修復的調控及其STAT3信號機制[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

10 王靜;紫外線誘導的大鼠晶狀體氧化損傷和防御機制的實驗研究[D];山東大學;2010年

相關碩士學位論文 前10條

1 劉志濤;αB-晶狀體蛋白在不同周齡正常大鼠晶狀體中的表達[D];吉林大學;2012年

2 吳怡;二肽基肽酶Ⅱ在人的年齡相關性白內(nèi)障晶狀體中的表達[D];吉林大學;2010年

3 占志云;年齡相關性白內(nèi)障晶狀體水通道蛋白0、1的表達及其超微結構觀察[D];福建醫(yī)科大學;2012年

4 王丹;玻璃體對高氧誘導晶狀體損傷的保護作用[D];第四軍醫(yī)大學;2010年

5 吳燕燕;IFN-γ和TGF-β_1在高氧肺損傷中的機制和干預研究[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

6 王萍;高氧誘導兔晶狀體混濁的發(fā)生機制和藥物治療的研究[D];第四軍醫(yī)大學;2009年

7 黨潤;TGF-β1和MMPs參與高氧肺損傷的發(fā)病機制及防治研究[D];重慶醫(yī)科大學;2004年

8 聶川;未成熟新生鼠高氧肺損傷超微結構改變及TGFβ_1的表達[D];暨南大學;2003年

9 周鐘強;兔增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變視網(wǎng)膜蛋白質組學的初步研究[D];重慶醫(yī)科大學;2011年

10 朱寧一;血必凈注射液對新生大鼠高氧性肺損傷的保護作用[D];中南大學;2011年

，

本文編號：2418065