【摘要】：背景 葡萄膜炎通常是指發(fā)生于葡萄膜、視網膜及視網膜血管的炎癥疾病。多為葡萄膜炎多發(fā)生于青壯年，往往反復發(fā)作，治療棘手，并且由于導致視網膜和視神經的損害，其所致盲為不可逆和永久性盲目。VKH綜合征是一種以葡萄膜炎、腦膜刺激征、白癜風和聽力損害為特征的自身免疫性疾病。Behcet病是一種以葡萄膜炎、復發(fā)性口腔潰瘍和生殖器潰瘍、多形性皮膚病變、常伴發(fā)自行消退和惡化為特征的多系統(tǒng)、多器官受累的炎癥性疾病。Behcet病、VKH綜合征是我國致盲率最高和最常見的葡萄膜炎類型，兩者的病因目前還不清楚，但自身免疫反應失調參與了兩種疾病的發(fā)生，據報道這兩種疾病中都存在Th17和Treg細胞功能和數(shù)量的異常。白介素27（IL-27）主要由抗原提呈細胞分泌產生，在自身免疫動物模型中發(fā)現(xiàn)IL-27可以通過抑制Th17極化和促進調節(jié)性T細胞的誘導從而抑制炎癥的發(fā)生和發(fā)展。但是，IL-27在人類自身免疫性疾病中的作用還不是很清楚。最近研究報道發(fā)現(xiàn)芳香烴受體（AhR）可以參與自身免疫性疾病的發(fā)生和發(fā)展。AhR的配體ITE可以抑制EAE的炎癥嚴重程度，AhR基因缺陷的巨噬細胞分泌更多的炎性細胞因子。但AhR在人類自身免疫性疾病的確切作用尚不清楚。 基于上述研究背景，本課題主要進行以下兩方面的實驗：1.探討IL-27和AhR在VKH綜合征或Behcet病患者的表達水平，以期確定其是否參與這兩種疾病的發(fā)生和發(fā)展。2.進一步探討IL-27和AhR在這兩種疾病發(fā)生中的作用及機制。通過上述研究，以期闡明這兩種疾病的發(fā)生機制，為其防治提供新策略和新靶點。 第一部分IL-27在Vogt-小柳原田綜合征發(fā)病機制作用中的研究 目的： 盡管VKH綜合征被認為是一種自身免疫性疾病，但是其確切的發(fā)病機制尚不清楚。在動物模型的研究中發(fā)現(xiàn)IL-27是促炎T細胞免疫反應的抑制者。在此，我們主要探討IL-27在Vogt-小柳原田綜合征發(fā)病中所起的作用。 方法： 分別抽取VKH綜合征的活動期和靜止期患者，正常對照組的外周靜脈血，分離外周血單個核細胞，使用熒光定量PCR技術檢測IL-27P28和EBI3的mRNA表達水平；使用ELISA方法檢測血清，PBMCs，naiveCD4+T細胞和DC-T細胞共培養(yǎng)上清中的細胞因子水平。利用流式技術檢測IL-17陽性T細胞的比例。 結果： （1）活動期VKH患者PBMCs中IL-27p28mRNA（IL-27獨有的亞單位）水平顯著低于VKH靜止期患者和正常對照組，而三組中EBI3mRNA的表達水平無統(tǒng)計學差異�；顒悠赩KH患者中IL-27血清水平顯著低于靜止期患者和正常對照組，而靜止期患者和正常對照組之間沒有統(tǒng)計學差異�；顒悠赩ogt-小柳原田綜合征患者PBMCs無論是否有SAC刺激，其培養(yǎng)上清中IL-27水平顯著低于靜止期患者和正常對照組，而靜止期VKH綜合征患者和正常對照組的PBMC是否SAC刺激，，其培養(yǎng)上清中IL-27水平無統(tǒng)計學差異。 （2）活動期VKH綜合征患者PBMCs中產生IL-17陽性的CD4+T細比例顯著高于靜止期VKH患者和正常對照組，而在靜止期VKH患者和正常對照組之間分泌IL-17陽性的CD4+T細胞比例無統(tǒng)計學差異。 （3）重組IL-27顯著抑制VKH患者和正常對照組中na ve CD4+T細胞向Th17細胞分化和IL-17分泌. IL-27處理的DC可以顯著抑na ve CD4+T細胞向Th17細胞分化。 （4） IL-27顯著促進na ve CD4+T細胞分泌IL-10，而且活動期VKH綜合征患者的naiveCD4+T細胞在IL-27的刺激下分泌IL-10的水平顯著低于靜止期患者和正常對照組。 （5） VKH患者經過藥物治療后，血清中IL-27水平顯著升高，PBMCs分泌IL-27水平也顯著上調，體外實驗發(fā)現(xiàn)糖皮質激素可以顯著促進PBMCs分泌IL-27，而環(huán)孢素對IL-27分泌沒有影響。 結論： 我們的結果顯示：活動期VKH患者中IL-27表達降低可能導致Th17細胞的高表達，進而參與了疾病的發(fā)生和發(fā)展。調節(jié)IL-27將可能為治療此類疾病提供一個新策略。 第二部分芳香烴受體在Behcet病發(fā)病機制中作用的研究 目的： 最新研究發(fā)現(xiàn)芳香烴受體（AhR）在免疫和炎癥反應中起著重要作用。AhR通過與其配體（例如非毒性的FICZ和ITE）發(fā)揮作用。Behcet病是一個自身炎癥性疾病，在本項目研究中，我們探討AhR在Behcet病發(fā)病機制中的作用及其機制。 方法： 分別抽取活動期Behcet病患者、靜止期Behcet病患者和正常對照組的外周血，分離外周血單個核細胞（PBMCs），磁珠分離單核細胞和CD4+T細胞。利用熒光定量PCR的方法檢測PBMCs中AhR表達水平，利用ELISA方法檢測PBMCs培養(yǎng)上清， CD4+T細胞培養(yǎng)上清，DCs和DC/T細胞共培養(yǎng)上清中細胞因子水平；利用流式檢測產生IL-17和INF-γ的CD4+T細胞比例。 結果： （1） AhR在活動期Behcet病患者PBMCs中mRNA表達水平降低�；顒悠贐ehcet病患者PBMCs在anti-CD3/CD28的刺激下分泌IL-17，IFN-γ和IL-22的水平顯著高于正常對照組。FICZ和ITE能夠顯著抑制Behcet病患者和正常對照組PBMCs分泌IL-17，IFN-γ，并可以顯著促進其分泌IL-22。 （2）活動期Behcet病患者CD4+T細胞分泌IFN-γ, IL-17和IL-22的水平顯著高于正常對照組。而且FICZ和ITE可以抑制CD4+T細胞分泌IFN-γ和IL-17，而對IL-22分泌具有促進作用。在FICZ和ITE對CD4+T細胞作用的過程中，F(xiàn)ICZ和ITE能夠顯著上調STAT3和STAT5的磷酸化水平，而對于STAT1和STAT4的磷酸化水平沒有統(tǒng)計學的影響。FICZ和ITE不僅可以分別顯著抑制Th1和Th17細胞重要的轉錄因子T-bet和RORC表達，而且對Th17細胞功能和亞型維持的分子IL-23R和CCR6也有顯著的抑制作用。 （3）FICZ和ITE可以顯著抑制活動期Behcet病患者和正常對照組中LPS-處理的DCs表面HLA-DR，CD80和CD86分子的表達水平，對DCs表面CD40和CD83的表達水平沒有統(tǒng)計學影響。 （4）活動期Behcet病患者LPS處理的DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α水平顯著高于正常對照組。FICZ和ITE能夠顯著抑制活動期Behcet病患者和正常對照組DCs分泌IL-1β、IL-6、IL-23和TNF-α。而對于抗炎因子，F(xiàn)ICZ和ITE能夠促進活動期Behcet病患者和正常對照組DCs分泌IL-10。 （5）FICZ和ITE對DC啟動的Th1和Th17細胞極化具有抑制作用。 結論： 本部分研究顯示了AhR的表達降低與Behcet病的活動性相關，AhR活化降低導致了Th1和Th17細胞免疫反應的上調。AhR活化還可以控制DC的分化、成熟和功能。因此，調節(jié)AhR激活可能為治療此類疾病提供了一個新策略。
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【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R773.9

【參考文獻】

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1 楊培增,張震,王紅,周紅顏,黃祥坤,李兵;葡萄膜炎的臨床類型及病因探討[J];中華眼底病雜志;2002年04期

本文編號：2291164