發(fā)布時間：2018-10-14 08:32

【摘要】：目的：建立兔感染茄病鐮刀菌的真菌性角膜炎模型,監(jiān)測模型眼不同時期淚液中(1,3)-8-D-葡聚糖的濃度變化,結合病變角膜組織中菌絲負荷及角膜潰瘍臨床評分進行分析,討論(1,3)-p-D-葡聚糖檢測評價真菌性角膜炎動物模型的可行性；通過藥物治療真菌性角膜炎動物模型,觀察(1,3)-β-D-葡聚糖在真菌性角膜炎愈合過程中的濃度變化,進一步討論(1,3)-β-D-葡聚糖評價藥物治療真菌性角膜炎療效的應用,為探索一種真菌性角膜炎無創(chuàng)篩查和定量評價手段提供理論依據(jù)。 方法：1.新西蘭大耳白兔32只,隨機選取16只為實驗組,16只為陰性對照組。實驗組采用角膜劃痕法接種標準茄病鐮刀菌株,制作真菌性角膜炎動物模型,陰性對照組接種生理鹽水’。均為右眼接種,左眼為正常對照組。每日行裂隙燈顯微鏡檢查,于病程第3、7、15、21天進行臨床評分,并分別收集三組淚液10μL行(1,3)-β-D-葡聚糖濃度檢測。分別于上述各時間點隨機選取實驗組4只、陰性對照組4只經(jīng)耳緣靜脈栓塞處死后,留取角膜組織行組織病理學檢查。觀察病情進展情況。2.新西蘭大耳白兔42只,按第一部分的方法,接種茄病鐮刀菌,均為右眼接種。從42只兔真菌性角膜炎模中挑選臨床評分接近的36只進行實驗,隨機分為治療組18只、對照組18只。治療組自成模后第1天即予5%那他霉素滴眼液點眼,對照組不予干預。分別于治療前,治療第3、5、10、15、21天收集患眼淚液行(1,3)-β-D-葡聚糖濃度檢測,并于上述相同時間點隨機選取治療組3只、對照組3只處死后留取角膜組織,以角膜潰瘍?yōu)橹行姆肿鲀煞?一份行組織病理學檢查,一份置于經(jīng)高壓消毒的EP管中用于MMP-9蛋白Western-blot檢測。觀察抗真菌藥物治療療效。 結果：1.兔感染茄病鐮刀菌性角膜炎模型建立成功,成功率100%。病程第3、7、15、21天,實驗組淚液中(1,3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(656.32±97.63)pg/mL、(858.29±96.26)pg/mL、(1047.49±105.36)pg/mL、(1679.47±124.42)pg/mL,而正常對照組和陰性對照組各時間點葡聚糖濃度全部穩(wěn)定于20pg/mL以下,顯著低于實驗組(F=69.05,P0.01)。從實驗組(1,3)-p-D-葡聚糖濃度的變化來看,隨著真菌性角膜炎病情的進展,(1,3)-β-D-葡聚糖濃度隨之升高,而角膜組織中真菌負荷未增高,甚至有減少趨勢。 2.治療組治療第3、5、10、15、21天(1,3)-β-D-葡聚糖濃度分別為(438.38±79.58)pg/mL.(194.39±23.54)pg/mL.(106.54±19.87)(58.36±10.39)pg/mL,(16.27±3.42)pg/mL；而對照組在病程第3天時濃度為(554.56±92.26)pg/mL,隨后逐日升高,至21天時升至(1894.47±156.47)pg/mL,兩組間各檢測時間點濃度差異均有顯著統(tǒng)計學意義(F=217.65,227.96,P0.01)。角膜組織中MMP-9Western blot檢測結果顯示,治療前,兩組MMP-9蛋白均有表達,差異無統(tǒng)計學意義(T=1.358,P0.05)；至治療15、21天,對照組蛋白表達量明顯增加,而治療組無升高,甚至開始下降,差異均有顯著統(tǒng)計學意義(T=9.396,25.475,P0.01)。 結論：1.淚液中(1,3)-β-D-葡聚糖濃度與真菌性角膜炎臨床評分有相關性,能夠定量評價角膜真菌感染的嚴重程度,較臨床評分等半定量評價手段更優(yōu)；角膜真菌負荷僅能評價造模是否成功,不能評價角膜炎癥程度。 2.淚液(1,3)-β-D-葡聚糖檢測作為一種取材簡便、準確定量的檢測方法,能夠量化評價藥物治療真菌性角膜炎療效。
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【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R772.21

【參考文獻】

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本文編號：2269923