本文關(guān)鍵詞：MMP-2和TIMP-1在閉角型青光眼患者房水中的定量研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

《中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院》 2014年

AngⅡ、醛固酮致心肌纖維化及Wnt1在其中的作用

謝永進(jìn)  

【摘要】：目的探討大鼠心肌成纖維細(xì)胞(cardiac fibroblasts，CFs)經(jīng)血管緊張素Ⅱ (angiotensinⅡ,Ang Ⅱ)、醛固酮及其受體拮抗劑干預(yù)后CFs細(xì)胞活性的改變以及對(duì)細(xì)胞中致心肌纖維化相關(guān)基因表達(dá)的影響，同時(shí)深入研究Wnt1基因在該過程中的作用，為預(yù)防和控制心肌纖維化提供新的理論依據(jù)。 方法采用膠原酶II消化法、差速貼壁法提取純化CFs，在AngⅡ、醛固酮及其受體拮抗劑作用下，應(yīng)用Cell Counting Kit-8（CCK-8）活細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒檢測成纖維細(xì)胞活性，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reverse transcription polymerasechain reaction, RT-PCR)方法檢測細(xì)胞中靶基因及相關(guān)基因mRNA表達(dá)的變化，Western blot方法檢測細(xì)胞中靶基因及相關(guān)基因蛋白表達(dá)的變化。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預(yù)的心肌成纖維細(xì)胞，應(yīng)用RNAi技術(shù)敲低Wnt1基因表達(dá)后，分別應(yīng)用CCK-8、RT-PCR、Western blot方法檢測細(xì)胞活性、靶基因及相關(guān)基因表達(dá)的變化。 結(jié)果與對(duì)照組比較，AngⅡ、醛固酮獨(dú)立干預(yù)可明顯促進(jìn)CFs細(xì)胞活性增加，AngⅡ、醛固酮聯(lián)合干預(yù)的細(xì)胞增殖活性較AngⅡ、醛固酮單獨(dú)干預(yù)更高，且AngⅡ、醛固酮的受體拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導(dǎo)的細(xì)胞增殖效應(yīng)；與對(duì)照組比較，，AngⅡ、醛固酮可顯著促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞I型膠原前膠原A1（collagen, type I, alpha1，Col1a1）、III型膠原前膠原A1（collagen, type III, alpha1，Col3a1）、基質(zhì)金屬蛋白酶1(matrixmetalloproteinase1，MMP1) mRNA和蛋白表達(dá)，同時(shí)抑制基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子1(tissue inhibitors of the factor matrix metalloproteinase1，TIMP1)mRNA和蛋白表達(dá)；和醛固酮組比較，AngⅡ組在促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞Col1a1、Col3a1、MMP1基因表達(dá)增加和TIMP1減低方面作用更強(qiáng)；氯沙坦、螺內(nèi)酯可顯著抑制AngⅡ、醛固酮誘導(dǎo)的Col1a1、Col3a1、MMP1mRNA和蛋白表達(dá)的增加，同時(shí)升高TIMP1mRNA和蛋白表達(dá)。經(jīng)AngⅡ、醛固酮干預(yù)的心肌成纖維細(xì)胞，利用Wnt1-siRNA敲低Wnt1基因后，細(xì)胞增殖活性明顯降低，靶基因Wnt1及膠原基因Col1a1、Col3a1表達(dá)均相應(yīng)減低。 結(jié)論AngⅡ、醛固酮可促進(jìn)體外培養(yǎng)大鼠CFs細(xì)胞數(shù)量增殖和增加細(xì)胞內(nèi)Ⅰ、Ⅲ型膠原表達(dá)，AngⅡ、醛固酮同時(shí)干預(yù)時(shí)具有協(xié)同和疊加效應(yīng)，且AngⅡ在促進(jìn)心肌膠原表達(dá)方面較醛固酮更強(qiáng)；而它們的拮抗劑氯沙坦、螺內(nèi)酯可抑制這些效應(yīng)，其作用機(jī)制可能通過影響MMPs/TIMPs的平衡，使心臟膠原合成與分解代謝紊亂，增加CFs細(xì)胞增殖活性，促進(jìn)心臟纖維化，而氯沙坦、螺內(nèi)酯可通過抑制CFs細(xì)胞增殖和膠原表達(dá)抑制心肌纖維化。體外培養(yǎng)的心肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)染W(wǎng)nt1-siRNA后，AngⅡ、醛固酮的促細(xì)胞增殖活性明顯減低，膠原蛋白表達(dá)明顯降低，Wnt信號(hào)通路可能參與AngⅡ、醛固酮促心肌纖維化的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過程。

【關(guān)鍵詞】：
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R542.23
【目錄】：

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本文編號(hào)：215005