發(fā)布時間：2018-07-28 10:42

【摘要】：目的：研究富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白(SPARC)基因在喉癌及下咽癌細胞系及組織中的表達水平以及啟動子區(qū)甲基化狀態(tài),探討SPARC對喉癌及下咽癌發(fā)生發(fā)展所起的作用。 方法：逆轉(zhuǎn)錄—聚合酶鏈式反應(RT-PCR)檢測5株頭頸腫瘤細胞系、51例喉癌下咽癌組織及9例配對相鄰正常上皮組織中SPARC基因的mRNA表達；甲基化特異性PCR (MSP)檢測上述樣本中SPARC基因的甲基化狀態(tài)；亞硫酸氫鹽測序(BISQ)檢測細胞系、腫瘤組織及正常組織樣本中SPARC基因啟動子區(qū)甲基化位點；甲基化轉(zhuǎn)移酶抑制劑5-aza-dC處理SPARC表達失活的腫瘤細胞系,觀察SPARC基因的表達恢復情況；統(tǒng)計學方法分析SPARC異常甲基化的臨床意義。 結(jié)果：SPARC基因在5個頭頸腫瘤細胞系中表達沉默,在SPARC基因啟動子區(qū)CpG島甲基化的腫瘤組織中,SPARC的表達量明顯低于其非甲基化的腫瘤組織(P0.05)。而腫瘤組織SPARC基因的表達與相鄰正常上皮組織相比較無明顯差異。在56.1%(23/41)喉癌及70.0%(7/10)下咽癌組織中SPARC基因啟動子區(qū)呈現(xiàn)異常甲基化狀態(tài),而相鄰配對正常上皮組織僅有11.9%(1/9)。腫瘤細胞系及腫瘤組織中SPARC基因啟動子區(qū)CpG島的CG位點出現(xiàn)異常甲基化。在淋巴轉(zhuǎn)移的喉癌及下咽癌的病例中甲基化頻率明顯高于無轉(zhuǎn)移者。 結(jié)論：在喉癌及下咽癌中SPARC基因高甲基化為頻發(fā)事件,SPARC可作為用于喉癌及下咽癌的診斷及預后的一種潛在生物分子標記。
[Abstract]:Aim: to investigate the expression of cysteine-rich acidic secretory protein (SPARC) gene in laryngeal and hypopharyngeal cancer cells and its promoter methylation status, and to explore the role of SPARC in the occurrence and development of laryngeal and hypopharyngeal carcinoma. Methods: reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR) was used to detect the mRNA expression of SPARC gene in 5 head and neck tumor cell lines in 51 cases of hypopharyngeal carcinoma and 9 cases of adjacent normal epithelium. Methylation of SPARC gene was detected by methylation specific PCR (MSP), methylation site of SPARC gene promoter in tumor tissue and normal tissue was detected by (BISQ) sequencing. Methyltransferase inhibitor 5-aza-dC treated SPARC inactivated tumor cell lines and observed the recovery of SPARC gene expression. The clinical significance of SPARC abnormal methylation was analyzed by statistical method. Results the expression of SPARC gene was silenced in 5 head and neck tumor cell lines, and the expression of SPARC in CpG island methylated tumor tissue of SPARC gene promoter was significantly lower than that in non-methylated tumor tissue (P0.05). However, the expression of SPARC gene in tumor tissues was not significantly different from that in adjacent normal epithelial tissues. In 56.1% (23 / 41) of laryngeal carcinoma and 70.0% (7 / 10) of hypopharyngeal carcinoma, the promoter region of SPARC gene showed abnormal methylation, while that of adjacent paired normal epithelium was only 11.9% (1 / 9). There was abnormal methylation in CpG island of SPARC gene promoter in tumor cell line and tumor tissue. The frequency of methylation in laryngeal and hypopharyngeal carcinoma with lymphatic metastasis was significantly higher than that without metastasis. Conclusion: the hypermethylation of SPARC gene in laryngeal and hypopharyngeal carcinoma can be used as a potential biomolecular marker for diagnosis and prognosis of laryngeal and hypopharyngeal carcinoma.
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2011
【分類號】：R739.65

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