本文選題：細胞粘附激酶β + 血管內(nèi)皮細胞生長因子　； 參考：《蘇州大學》2010年博士論文

【摘要】：【目的】視網(wǎng)膜新生血管形成(retinal neovascularization,RNV)是多種缺血缺氧性眼底病共有的病理改變。RNV會引起視網(wǎng)膜纖維組織增生,視網(wǎng)膜脫離,甚至視力喪失,已成為發(fā)達國家致盲性眼病的首要原因,也成為威脅我國人民視力健康的重要原因。明確RNV發(fā)生發(fā)展及其調(diào)控的分子機制,并進而尋找新的非侵入性的治療方法已成為眼底病研究的重要課題。細胞粘附激酶β(cellular adhesion kinaseβ, CAKβ)是一種能被細胞內(nèi)鈣濃度增高及多種刺激信號激活的具有明顯的酪氨酸激酶和自身激酶活性的信號分子,參與細胞的生長、增殖、分化等,與細胞多種信號轉導途徑和多種生物學功能有密切關系。然而,CAKβ在RNV中的作用及其與VEGF的關系尚不清楚。本研究建立氧誘導視網(wǎng)膜新生血管形成模型,觀察VEGF、CAKβ基因及蛋白的表達,探討CAKβ通路在RNV中的作用以及氟伐他汀、厄貝沙坦干預對其的影響。 【方法】參照文獻建立氧誘導的小鼠視網(wǎng)膜新生血管形成(oxygen-induced retinopathy, OIR)模型。(1)選擇健康7日齡(P7)C57BL/6J小鼠,共80只,雌雄不拘。隨機分為高氧組(OIR組)和對照組(C組)。分別在P12、P14、P17、P19處死幼鼠。(2)選擇P7 C57BL/6J小鼠共180只,雌雄不拘。隨機分為C組、OIR組及模型+貝伐單抗組(BVZ組)。BVZ組在P12時腹腔麻醉后玻璃體內(nèi)注射貝伐單抗5mg/Kg,分別在P12、P14、P17處死幼鼠。(3)選擇P7 C57BL/6J小鼠共140只,雌雄不拘。隨機分為5組:C組、模型+氟伐他汀組(FVS組)(P12時腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射氟伐他汀10mg/Kg/d)、模型+厄貝沙坦組(IBS組)(P12時腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射厄貝沙坦50mg/Kg/d)、模型+氟伐他汀組+厄貝沙坦組(FVS+IBS組)(P12時腹腔麻醉后雙眼玻璃體內(nèi)注射同上劑量的氟伐他汀及厄貝沙坦)、OIR組。P17處死幼鼠。(4)視網(wǎng)膜組織切片及鋪片定性及定量觀察RNV;2’,7’-二氯雙氫熒光素雙乙酸酯(DCFH-DA)熒光探針檢測細胞內(nèi)活性氧(ROS)水平,實時RT-PCR檢測VEGF mRNA、CAKβmRNA表達,Western blot技術檢測VEGF蛋白、CAKβ及其Tyr402磷酸化蛋白表達。 【結果】(1)將P7幼鼠置于75%高氧環(huán)境5天后移至正常氧環(huán)境,可成功誘導出RNV模型。P14即可產(chǎn)生視網(wǎng)膜新生血管,P17新生血管最明顯。新生血管內(nèi)皮細胞內(nèi)ROS水平改變與定量及定性觀察到的視網(wǎng)膜新生血管變化相一致。(2)正常新生小鼠P12時,視網(wǎng)膜VEGF mRNA及蛋白表達,CAKβmRNA及蛋白表達,CAKβTyr402/CAKβ比值均處于最高;OIR組自P12開始,VEGF mRNA及蛋白表達,CAKβmRNA及蛋白及磷酸化蛋白表達顯著升高,到P17時達高峰,CAKβTyr402/CAKβ比值在P14,P17也顯著高于對照組;貝伐單抗干預后第2天,VEGF mRNA及蛋白表達即顯著低于同時段OIR組,與同時段C組無顯著差異,其后一直處于較低水平。CAKβmRNA及蛋白表達也顯著低于同時段OIR組,但仍顯著高于同時段C組。表明貝伐單抗對于VEGF及CAKβ的表達均具有良好的抑制作用,但對CAKβ的抑制效率不及VEGF。(3)厄貝沙坦干預組及氟伐他汀干預組新生血管增生情況明顯延緩,突破內(nèi)界膜的細胞核計數(shù)均顯著少于非干預組,細胞內(nèi)ROS水平、VEGF mRNA及蛋白表達、CAKβmRNA以及CAKβ及其Tyr402磷酸化蛋白均較非干預組有顯著下降。而兩藥聯(lián)用在上述指標均優(yōu)于各自單獨用藥。 【結論】(1)氧化應激、VEGF及CAKβ在RNV中起重要作用。(2)貝伐單抗對VEGF及CAKβ均具有良好的抑制作用,但對CAKβ的抑制效率不及VEGF。(3)厄貝沙坦及氟伐他汀均能有效降低ROS水平、下調(diào)VEGF及CAKβ表達,改善血管新生。兩藥聯(lián)用更有利于改善視網(wǎng)膜新生血管形成。(4)CAKβ參與了RNV的多種信號通路, CAKβ可能是抗RNV治療的一個新的靶分子。
[Abstract]:Retinal neovascularization ( RNV ) is the primary cause of blindness in developed countries . It is an important cause of blindness in developed countries . The role of RNV in RNV and its relationship with VEGF are not clear .


Methods The expression of VEGF mRNA , CAK尾 mRNA and its Tyr402 phosphorylation protein in mice were randomly divided into five groups : group C , model + fluvastatin group ( FVS + IBS group ) .


The expression of VEGF mRNA and protein , CAK尾 mRNA and protein expression and CAK尾 Tyr402 / CAK尾 were significantly lower than those in non - intervention group . The expression of CAK尾 mRNA and protein was significantly lower than that in non - intervention group . The expression of CAK尾 mRNA and protein was significantly lower than that in non - intervention group .


Conclusion : ( 1 ) Oxidative stress , VEGF and CAK尾 play an important role in RNV .
【學位授予單位】：蘇州大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R774.1

【共引文獻】

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本文編號：2088907