發(fā)布時間：2018-06-27 05:22

  本文選題：P53磷酸化 + 鼻咽癌　； 參考：《中南大學(xué)》2013年碩士論文

【摘要】：目的：建立鼻咽癌HNE2放射不敏感細胞系,即HNE2-NRC,研究HNE2-NRC與HNE2細胞系中P53磷酸化的差異性表達,并在鼻咽部組織芯片中檢測P53Ser376位點磷酸化水平,探討P53蛋白磷酸化與鼻咽癌治療反應(yīng)的關(guān)系。 方法：通過亞致死射線劑量、遞增射線劑量反復(fù)照射人鼻咽癌細胞株HNE2的方法建立放射不敏感細胞株HNE2-NRC以HNE2-NRC及HNE2為研究對象,觀察不同的放射劑量照射前后細胞形態(tài)、細胞增殖、細胞凋亡及細胞周期的變化。倒置顯微鏡下觀察細胞形態(tài)的變化,克隆形成實驗觀察細胞克隆形成率及生長曲線、MTS法測定放射線照射后細胞增殖抑制。流式細胞術(shù)檢測HNE2-NRC及HNE2細胞周期的差異。Western Blotting測定HNE2-NRC與HNE2細胞系中P53磷酸化的差異性表達,免疫組化法檢測鼻咽部組織芯片中P53Ser376位點磷酸化水平。 結(jié)果：克隆形成實驗表明HNE2-NRC較HNE2克隆形成力強,放療增敏比SER為0.7961。MTS實驗檢測到HNE2與HNE2-NRC相比,生長受到抑制,在6h、2d、6d、8d時差別均有統(tǒng)計學(xué)意義。流式細胞檢測兩株細胞周期具有差異,HNE2G2/M期細胞比率為23.88%,而HNE2-NRC G2/M期細胞比率為10.84%,且HNE2-NRC G0/G1期細胞比率增加。Western Blot結(jié)果顯示HNE2-NRC與HNE2相比,P53、P53Ser15、Thr81、Thr55、 Ser389磷酸化水平升高,而Ser6、Ser9、Ser315、Ser376磷酸化水平降低。免疫組化染色檢測鼻咽部組織芯片中P53Ser376表達,放療后生存期5年的患者與放療后生存期5年的患者相比較,P53Ser376磷酸化水平有降低的趨勢。 結(jié)論： 1、本研究建立了放射不敏感細胞系HNE2-NRC,與親本細胞HNE2相比,具有耐放射的生長特性。 2、在HNE2-NRC細胞中,P53Serl5、Thr55磷酸化水平升高；而P53Ser315、Ser376發(fā)生去磷酸化,提示P53相關(guān)位點的磷酸化特征譜與鼻咽癌放射抵抗相關(guān)。 3、在組織芯片水平,P53Ser376磷酸化水平與放射治療的鼻咽癌病人預(yù)后呈一定的相關(guān)性,進一步提示P53磷酸化譜作為放療敏感性預(yù)測的可能性。圖10幅,表4個,參考文獻124篇。
[Abstract]:Objective: to establish a radiosensitive HNE2 cell line, HNE2-NRC, to study the differential expression of p53 phosphorylation in HNE2-NRC and HNE2 cell lines, and to detect the phosphorylation level of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray. To investigate the relationship between p53 protein phosphorylation and the therapeutic response of nasopharyngeal carcinoma (NPC). Methods: human nasopharyngeal carcinoma cell line HNE2 was irradiated repeatedly by sublethal and incremental radiation doses. HNE2-NRC and HNE2-NRC were used to observe the morphology of HNE2-NRC and HNE2 cells before and after irradiation. Cell proliferation, apoptosis and cell cycle changes. The cell morphology was observed under inverted microscope, the colony formation rate was observed and the growth curve was used to determine the inhibition of cell proliferation after irradiation. The difference of HNE2-NRC and HNE2 cell cycle was detected by flow cytometry. Western blotting was used to detect the expression of p53 phosphorylation in HNE2-NRC and HNE2 cell lines. The phosphorylation level of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray was detected by immunohistochemistry. Results: the clone forming ability of HNE2-NRC was stronger than that of HNE2. The sensitivity ratio of HNE2-NRC was 0.7961.MTS assay showed that HNE2 was inhibited compared with HNE2-NRC, and the difference was significant at 6h / 2d ~ 6d ~ (-1). The cell ratio of HNE2-NRC G _ 2 / M phase was 23.88, while that of HNE2-NRC G _ 2 / M phase was 10.84 and the ratio of HNE2-NRC G _ 0 / G _ 1 phase increased. Western blot analysis showed that the phosphorylation level of P53P53SerSer15Thr81Thr55, Ser389 was increased, while Ser6Ser9Ser315Ser376 was decreased in HNE2-NRC G0 / G1 phase compared with HNE2. The expression of P53Ser376 in nasopharyngeal tissue microarray was detected by immunohistochemical staining. The phosphorylation level of P53Ser376 was decreased in patients with 5 years survival after radiotherapy and 5 years after radiotherapy. Conclusion: 1. The radiosensitive cell line HNE2-NRC2.Compared with parent HNE2, HNE2-NRC2.2The phosphorylation level of P53Serl5hr55 in HNE2-NRC cells was increased, while that of P53Ser315Ser376 was dephosphorylated. It was suggested that the phosphorylation characteristic spectrum of p53 related sites was related to the radiation resistance of nasopharyngeal carcinoma. 3. The phosphorylation level of p53 Ser376 was correlated with the prognosis of patients with nasopharyngeal carcinoma after radiotherapy at the tissue microarray level. It is further suggested that P 53 phosphorylation spectrum can be used as a predictor of radiotherapy sensitivity. Ten figures, four tables and 124 references.
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.63

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 劉靜霞;漆正堂;丁樹哲;;不同訓(xùn)練方式對大鼠腓腸肌p53和IL-6的影響[J];北京體育大學(xué)學(xué)報;2010年02期

2 沈衛(wèi)章,姜玉珍;p73基因與淋巴組織腫瘤[J];國外醫(yī)學(xué)(腫瘤學(xué)分冊);2005年06期

3 黃文彥;劉凱珊;;以新視角觀察p53家族在肺癌發(fā)生及治療中的獨特作用[J];中國肺癌雜志;2013年08期

4 王巖;黃堅;;TP53通路分子遺傳學(xué)改變與肝細胞癌[J];實用肝臟病雜志;2013年05期

5 劉丹丹;高志星;王婷;劉俊衡;孫娜;季萬勝;;p53選擇性剪接異構(gòu)體在胃癌中表達的研究[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2012年02期

6 宋偉;呂家駒;方笑雷;夏慶華;;p53β在腎細胞癌中的表達及其臨床意義的研究[J];泌尿外科雜志(電子版);2010年01期

7 李帥帥;孫軍;;PI3K/AKT/mTOR信號傳導(dǎo)通路在姜黃素抑制人肝癌細胞Cox-2表達中的作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2014年01期

8 濮曉紅;葉慶;;TP53基因在特定血液病和淋巴瘤中的研究進展[J];臨床腫瘤學(xué)雜志;2014年02期

9 吳煒景;趙亞剛;;p73與腫瘤相關(guān)性的研究進展[J];中華腫瘤防治雜志;2010年21期

10 郭志云;茆燦泉;熊莉麗;辛洪波;;p53直接調(diào)控microRNA及其靶基因的高通量篩選[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2009年09期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉堅;REGγ對p53蛋白活性調(diào)控的分子機制及其在腫瘤形成中的作用[D];華東師范大學(xué);2011年

2 張業(yè);抑癌基因產(chǎn)物p53在熱休克蛋白基因表達調(diào)控中的作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

3 柯玉文;Aurora激酶生化通路對細胞有絲分裂可塑性的調(diào)節(jié)作用[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2007年

4 劉愛華;p53和p38對UV誘導(dǎo)的細胞凋亡的抑制效應(yīng)及其機制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2007年

5 宋偉;p53選擇性剪接異構(gòu)體在腎細胞癌中的表達及其臨床意義的研究[D];山東大學(xué);2009年

6 周樂杜;PI3K/Akt/mTOR信號通路在肝細胞癌發(fā)病機制中的作用及靶向干預(yù)研究[D];中南大學(xué);2010年

7 黃星;凋亡抑制蛋白XIAP抑制自噬促進腫瘤形成的作用機制研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

8 王文宇;P53突變體獲得性功能在腫瘤發(fā)生中作用機制的研究[D];中國科學(xué)技術(shù)大學(xué);2013年

9 周必勝;幾個血管、淋巴管相關(guān)基因的調(diào)控與功能研究[D];華中科技大學(xué);2013年

10 艾熙;非Smad通路在小鼠結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中的作用[D];華中科技大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 劉沛;p63、p15和mdm2蛋白在人口腔扁平苔蘚和口腔鱗狀細胞癌中的表達及意義[D];鄭州大學(xué);2010年

2 趙小美;TP53基因改變影響MDM2抑制劑對神經(jīng)膠質(zhì)瘤的效應(yīng)及機制研究[D];河南大學(xué);2011年

3 李楊;絞股藍皂甙對光損傷小鼠皮膚p38、p42/p44影響的研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

4 周萍;REGγ和TGFβ、p53及其下游基因相關(guān)性的研究[D];華東師范大學(xué);2011年

5 曾鈺;對REGγ在癌癥信號通路中作用及其若干修飾的研究[D];華東師范大學(xué);2011年

6 紀(jì)葉;白藜蘆醇苷對腦梗死大鼠腦組織p53和Notch1表達的影響及其神經(jīng)保護作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

7 黃芳芳;烏賊墨寡肽酶解工藝及抗前列腺癌機制研究[D];浙江海洋學(xué)院;2011年

8 李會平;P27、PCNA、CyclinD1等因子的表達和乳腺癌早期浸潤的關(guān)系[D];河南科技大學(xué);2010年

9 趙貴民;P21蛋白在牛卵成熟過程中作用的初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2011年

10 鄭磊;TSP50在結(jié)直腸癌中的表達及其臨床意義初步研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2011年

，

本文編號：2072813