本文選題：人視網(wǎng)膜母細胞瘤 + 黃荊子��； 參考：《南華大學》2010年碩士論文

【摘要】： 目的 研究黃荊子乙酸乙酯提取物(EVn-50)抑制體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞(RB細胞)生長作用以及誘導RB細胞凋亡作用,為開發(fā)和研制臨床治療人視網(wǎng)膜母細胞瘤候選藥物提供實驗和理論依據(jù)。 方法 體外培養(yǎng)RB細胞;MTT比色法測定EVn-50對RB細胞增殖活性的影響;細胞計數(shù)法檢測RB細胞存活率,繪制生長曲線;軟瓊脂集落形成法測定EVn-50抑制體外培養(yǎng)RB細胞的錨定非依賴性生長作用;PI染色流式細胞術(FCM)定量分析EVn-50誘導RB細胞凋亡程度;AO/EB染色熒光顯微鏡觀察EVn-50誘導RB細胞凋亡的形態(tài)學改變;DNA瓊脂糖凝膠電泳確證EVn-50誘導RB細胞凋亡作用。 結(jié)果 MTT比色法測定結(jié)果顯示:EVn-50可作為黃荊子抗RB的有效提取物。EVn-50對RB細胞增殖活性抑制作用強,并呈濃度依賴性,其IC50為9.60μg/ml;細胞計數(shù)結(jié)果表明:0.3、3.0、30.0μg/ml的EVn-50均具有抑制RB細胞生長作用,呈濃度和時間依賴性;軟瓊脂集落形成法的結(jié)果表明:EVn-50對RB細胞錨定非依賴性生長具有明顯的抑制作用,并呈濃度依賴性。PI染色流式細胞術分析的量效實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn):0.3、3.0、30.0μg/ml的EVn-50作用于RB細胞48小時后的細胞凋亡率分別是(2.4±0.1)%、(17.4±0.6)%、(40.7±0.7)%;而時效實驗中30.0μg/ml的EVn-50作用于RB細胞24、48、72小時后的細胞凋亡率分別是(20.8±0.4)%、(40.7±0.7)%、(63.1±0.8)%;遠高于空白對照組的凋亡率(0.8±0.3)%。表明:EVn-50誘導RB細胞凋亡,并呈濃度和時間依賴性。AO/EB染色熒光顯微鏡觀察EVn-50處理后,部分RB細胞呈現(xiàn)胞質(zhì)和胞核呈紅色,核固縮或碎裂的典型凋亡細胞形態(tài)特征。EVn-50 0.3μg/ml、3.0μg/ml、30.0μg/ml分別處理RB細胞48小時,以及EVn-50 30.0μg/ml分別作用RB細胞0、24、48和72h瓊脂糖凝膠電泳出現(xiàn)典型“梯形”DNA條帶。 結(jié)論 1. EVn-50抑制體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細胞瘤細胞RB細胞生長,呈濃度和時間依賴性;EVn-50是黃荊子抗人視網(wǎng)膜母細胞瘤作用的有效提取物。 2. EVn-50有效誘導人視網(wǎng)膜母細胞瘤RB細胞凋亡,呈濃度和時間依賴性。
[Abstract]:Objective to study the inhibitory effect of ethyl acetate extract (EVn-50) on the growth and apoptosis of human retinoblastoma cells (RB cells) in vitro. To provide experimental and theoretical basis for the development and development of clinical drug candidates for the treatment of human retinoblastoma. Methods the effect of EVn-50 on the proliferation of RB cells was determined by MTT colorimetry in vitro, the survival rate of RB cells was measured by cell count method, and the growth curve was drawn. Inhibitory effect of EVn-50 on Anchorage Independent growth of RB cells in Vitro by soft Agar Colony Colony formation quantitative Analysis of apoptosis degree induced by EVn-50 by flow Cytometry (FCM) and fluorescence microscope of EVn-50 induced RB cells Morphological changes of apoptosis in RB cells induced by EVn-50 were confirmed by DNA agarose gel electrophoresis. Results the results of MTT colorimetric assay showed that WEVn-50 could inhibit the proliferation of RB cells in a concentration-dependent manner as an effective extract of Vitex chinensis L. against RB, and EVn-50 could inhibit the proliferation of RB cells in a dose-dependent manner. The IC50 of EVn-50 was 9.60 渭 g / ml, and the results of cell count showed that the EVn-50 of 30 渭 g/ml at 30 渭 g/ml could inhibit the growth of RB cells in a concentration-and time-dependent manner, and the results of soft Agar colony forming method showed that the growth of RB cells anchoring independent of EVn-50 was inhibited obviously by the method of soft Agar colony forming. The dose-effect analysis of flow cytometry in a concentration dependent manner with Pi staining showed that the apoptosis rates of RB cells treated with EVn-50 of 30.0 渭 g/ml at 30 渭 g/ml for 48 hours were (2.4 鹵0.1), (17.4 鹵0.6), (40.7 鹵0.7), respectively, while in the aging experiment, the effects of EVn-50 of 30.0 渭 g/ml on the fine cells of RB cells after 2448 hours were (2.4 鹵0.1), (17.4 鹵0.6), (40.7 鹵0.7), respectively. The apoptotic rate was (20.8 鹵0.4), (40.7 鹵0.7), (63.1 鹵0.8) and much higher than that in the control group (0.8 鹵0.3). The results showed that the apoptosis of RB cells was induced by w / EVn-50, and some RB cells showed red cytoplasm and nucleus after treated with EVn-50 in a concentration-and time-dependent manner. Morphological characteristics of typical apoptotic cells with nuclear pyknosis or fragmentation. EVn-50 0.3 渭 g 路ml ~ (-1) 路ml ~ (3) 渭 g / ml ~ (30) 渭 g/ml was used to treat RB cells for 48 hours, and EVn-50 ~ (30.0) 渭 g/ml was used to treat RB cells for 48 hours and 72 h after agarose gel electrophoresis, typical "trapezoid" DNA bands appeared. Conclusion 1. EVn-50 inhibits the growth of human retinoblastoma RB cells in a dose-and time-dependent manner. EVn-50 is an effective extract of Vitex chinensis against human retinoblastoma. 2. Human retinoblastoma RB cells were induced to apoptosis by EVn-50 in a concentration and time dependent manner.
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R739.7

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本文編號：2056460