本文選題：HXO-RB44細(xì)胞 + TRAIL　； 參考：《昆明醫(yī)學(xué)院》2011年碩士論文

【摘要】：目的： 通過研究TRAIL對人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤株HXO-RB44細(xì)胞的增殖抑制率、細(xì)胞周期的影響、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的情況等,探討TRAIL對HXO-RB44細(xì)胞的增殖抑制作用。通過研究TRAIL與DDP聯(lián)合應(yīng)用對HXO-RB44細(xì)胞的增殖抑制作用,探討TRAIL與DDP聯(lián)合化療方案如何減少藥物的用藥劑量,增強藥物療效,并為臨床應(yīng)用提供細(xì)胞學(xué)研究依據(jù)。 方法： 體外培養(yǎng)人視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤細(xì)胞株HXO-RB44細(xì)胞,采用對數(shù)生長期的細(xì)胞進行實驗。TRAIL以五種不同濃度(10ng/ml、50ng/ml、100ng/ml、200ng/ml、500ng/ml), DDP以四種不同濃度(1.0mg/L、10.0 mg/L、20.0 mg/L和50.0mg/L),分別單獨作用于HXO-RB44細(xì)胞,在24小時、48小時、72小時后,用MTT比色法檢測相應(yīng)的腫瘤細(xì)胞增殖抑制率,并觀察在不同時間段TRAIL與DDP對細(xì)胞形態(tài)及凋亡的影響。根據(jù)上述實驗結(jié)果,選取對HXO-RB44細(xì)胞有明顯抑制作用的TRAIL濃度T(200ng/ml TRAIL)和DDP濃度D(10.0 mg/L DDP)為基準(zhǔn),分別設(shè)計三種濃度梯度為：1/2T、T、2T,1/2D、D、2D,分別作用于HXO-RB44細(xì)胞,并分別在24小時、48小時、72小時后,用流式細(xì)胞術(shù)PI單染法測定細(xì)胞周期變化,TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡的情況。倒置顯微鏡下觀察HXO-RB44細(xì)胞的微觀形態(tài)學(xué)改變。選用T濃度TRAIL作用48小時的HXO-RB44細(xì)胞進行透射電鏡觀察。 取TRAIL(T代表200ng/ml TRAIL的濃度)與DDP(D代表10.0 mg/L DDP的濃度)分別配成四種方案,即實驗組(T+1/2D、T+D、1/2T+D、2T+D),并設(shè)陰性對照組和陽性對照組(D、1/2T、T、2T),以上各組分別作用于HXO-RB44細(xì)胞,分別在24小時、48小時、72小時后,用MTT法檢測細(xì)胞增殖抑制率。 結(jié)果： 一、TRAIL作用于HXO-RB44細(xì)胞對其增殖抑制作用較為明顯。TRAIL濃度為200ng/ml時,細(xì)胞抑制率明顯增加。TRAIL作用于HXO-RB44細(xì)胞48小時對該細(xì)胞的增殖抑制率最大,之后細(xì)胞增殖抑制率有下降趨勢。 流式細(xì)胞儀細(xì)胞周期檢測顯示：TRAIL作用24小時、48小時、72小時后G2/M期、G0/G1期及S期細(xì)胞所占比率,分別與對照組比較,差異缺乏統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 流式細(xì)胞儀TUNEL法檢測細(xì)胞凋亡顯示：100ng/ml TRAIL作用于HXO-RB44細(xì)胞24小時、48小時、72小時后,細(xì)胞凋亡率分別是：3.13%±0.09%、26.17%±1.04%、50.04%±0.91%、200ng/ml*TRAIL作用于HXO-RB44細(xì)胞24小時、48小時、72小時后,細(xì)胞凋亡率分別是：3.43%±0.37%、29.25%±0.67%、58.91%±0.2%。400ng/ml TRAIL作用于HXO-RB44細(xì)胞24小時、48小時、72小時后,細(xì)胞凋亡率分別是：23.89%±0.85%、51.65%±1.06%、60.32%±0.63%。三個TRAIL實驗組的細(xì)胞凋亡率在48小時、72小時均高于對照組,兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。相同TRAIL組在不同時間點的細(xì)胞凋亡率兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。隨著TRAIL濃度的增加和作用時間的延長,細(xì)胞凋亡率增加,呈量效時效相關(guān)性。 倒置顯微鏡下觀察：細(xì)胞逐漸減少甚至稀疏,粘附成團的細(xì)胞結(jié)合力下降,出現(xiàn)松散漂浮個體。隨著用藥濃度的增加和作用時間的延長,細(xì)胞有越來越稀疏的趨勢。透射電鏡下觀察：細(xì)胞核發(fā)生染色體邊集、固縮,新月體形成,電子密度增強,線粒體體積增大,腫脹呈空泡狀,可見細(xì)胞丫生出泡現(xiàn)象,形成典型的凋亡小體。 二、MTT法檢測不同藥物濃度方案在24小時、48小時、72小時后對HXO-RB44細(xì)胞的增殖抑制率顯示：實驗組TRAIL與DDP搭配的治療方案,細(xì)胞抑制率均有明顯提高,分別與單獨應(yīng)用TRAIL和DDP的陽性對照組比較顯著性差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。其中TRAIL(200ng/ml)+ DDP(10ug/ml)組在24小時、48小時、72小時的抑制率明顯優(yōu)于其他三組,實驗組組間兩兩比較顯著性差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)。陽性對照組和四個實驗組的細(xì)胞增殖抑制率均在48小時時最大,之后有下降趨勢。 結(jié)論： 1. TRAIL對HXO-RB44細(xì)胞有增殖抑制作用,48小時內(nèi)抑制作用隨時間延長而增大,其后抑制作用有逐漸降低趨勢。 2. TRAIL對HXO-RB44的細(xì)胞周期沒有明顯的影響。 3. TRAIL可誘導(dǎo)HXO-RB44細(xì)胞凋亡,細(xì)胞凋亡率隨藥物作用時間的延長及用藥濃度的增加而增大。 4. TRAIL與DDP聯(lián)合應(yīng)用時,可增強DDP對HXO-RB44細(xì)胞的細(xì)胞毒活性,減少其藥物劑量,降低其毒副反應(yīng),提高腫瘤細(xì)胞對TRAIL的敏感性,兩藥有協(xié)同抗腫瘤的作用。
[Abstract]:Objective:
The inhibitory effect of TRAIL on the proliferation of HXO-RB44 cells of human retinoblastoma, the effect of cell cycle and the induction of cell apoptosis, and so on, and to explore the inhibitory effect of TRAIL on the proliferation of HXO-RB44 cells. Through the study of the inhibitory effect of TRAIL and DDP on the proliferation of HXO-RB44 cells, how to combine TRAIL with DDP combined with chemotherapy is discussed. Reduce the dosage of drugs, enhance the efficacy of drugs, and provide cytological evidence for clinical application.
Method錛，

本文編號：1988078