本文選題：阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征 + 高血壓�。� 參考：《桂林醫(yī)學院》2013年碩士論文

【摘要】：目的：研究TLR4介導的p38MAPK信號通路在阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征（Obstractive SleepApnea Symptom，OSAS）伴高血壓大鼠脂肪組織、脂肪細胞中的表達，和對脂肪細胞因子leptin的影響，探討OSAS伴高血壓可能的發(fā)病機制。 方法：45只健康雄性SD大鼠隨機均分為間歇低氧4周組、間歇低氧6周組和正常對照組，間歇低氧4周組和6周組大鼠放入實驗艙中，循環(huán)充入氮氣和氧氣,每次循環(huán)90s,每天間歇性低氧8h,正常對照組大鼠暴露于空氣中不予任何特殊處理。分別測定實驗前和每周試驗后各組大鼠尾動脈血壓。于間歇低氧28、42d后分別處死間歇低氧4周組和6周組大鼠，HE染色觀察各組大鼠心肌、腎動脈的病理變化，ELISA法檢測各組大鼠血漿中l(wèi)eptin含量的變化，RT-PCR、Western-Blot法檢測脂肪組織中TLR4、p38MAPK mRNA和蛋白的表達； 取各模型組大鼠脂肪組織進行原代培養(yǎng)脂肪細胞，顯微鏡下觀察細胞形態(tài)改變，流式細胞儀檢測細胞增殖活性;油紅O染色法進行細胞鑒定；各組原代脂肪細胞分為12組:正常對照組，間歇低氧4周對照組，間歇低氧6周對照組，脂多糖誘導正常組，脂多糖誘導間歇低氧4周組，脂多糖誘導間歇低氧6周組，TLR4阻滯正常組，TLR4阻滯間歇低氧4周組，TLR4阻滯間歇低氧6周組， p38MAPK阻滯正常組， P38MAPK阻滯間歇低氧4周組，p38MAPK阻滯間歇低氧6周組。收集上述各組脂肪細胞，利用RT-PCR法和Western-blot法分別檢測TLR4、p38MAPK mRNA和蛋白的表達，另收集上述各組脂肪細胞培養(yǎng)液，利用ELISA法測定培養(yǎng)液中l(wèi)eptin的含量。 結(jié)果：1模型大鼠血壓逐漸升高，且出現(xiàn)以心肌細胞腫脹、腎動脈管壁增厚為特征的相關(guān)OSAS病理改變，從而成功建立OSAS合并高血壓大鼠模型。 2與正常對照組相比，間歇性低氧4周組、間歇性低氧6周組血清leptin含量升高（P0.05，P0.01），且間歇性低氧6周組升高更顯著（P0.05）。 3與正常對照組相比，間歇低氧4周組、間歇低氧6周組脂肪組織中TLR4、p38MAPK mRNA和蛋白表達水平均顯著升高(P0.05，P0.01)。 4成功培養(yǎng)原代大鼠脂肪細胞。細胞24小時貼壁時為類圓形，3d后漸成梭形或多角梭形，6d左右進入指數(shù)增長期；流式細胞儀檢測證明細胞具有增殖分化能力；經(jīng)誘導分化為成熟脂肪細胞，油紅O染色可見細胞內(nèi)出現(xiàn)紅染顆粒. 5TLR4介導p38MAPK信號通路在脂肪細胞中的表達：與對照組相比，，脂多糖可以上調(diào)TLR4、p38MAPK mRNA和蛋白的表達（P0.01, P0.05）；TLR4阻滯劑可以下調(diào)TLR4、p38MAPK mRNA和蛋白的表達（P0.01，P0.05）；p38MAPK阻滯劑僅下調(diào)p38MAPK mRNA和蛋白的表達（P0.05），對TLR4表達無意義。 6大鼠脂肪細胞中TLR4介導的p38MAPK信號通路對leptin分泌的調(diào)控：與對照組相比，脂多糖預處理組分泌leptin增加（P0.01），TLR4阻滯劑組分泌leptin減少(P0.05），P38MAPK阻滯劑組分泌leptin無意義（P0.05）。 結(jié)論： TLR4介導的p38MAPK信號通路在脂肪組織和脂肪細胞中表達，并通過對脂肪因子leptin的調(diào)控影響OSAS合并高血壓病情進展，為進一步尋找更有效的治療方法打下基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: To investigate the possible pathogenesis of OSAS associated hypertension by TLR4 mediated p38MAPK signaling pathway in Obstractive SleepApnea Symptom (OSAS) with adipose tissue, adipocyte expression, and the effect on Adipocyte Factor leptin in rats with obstructive sleep apnea syndrome (OSAS).
Methods: 45 healthy male SD rats were randomly divided into intermittent hypoxic 4 weeks group, intermittent hypoxia 6 week group and normal control group, intermittent hypoxic 4 week group and 6 week group of rats were put into the experimental cabin and circulate into nitrogen and oxygen, each cycle was 90s, intermittent hypoxia 8h, the normal control rats were exposed to air in no special treatment. The blood pressure of the tail artery of rats in each group before and after the experiment was measured. After intermittent hypoxic 28,42d, the rats were killed 4 weeks and 6 weeks respectively. The pathological changes of the myocardium and renal artery were observed by HE staining. The changes of leptin content in the plasma of the rats were detected by ELISA, and TLR4 and p38 in the adipose tissue were detected by RT-PCR and Western-Blot method. The expression of MAPK mRNA and protein;
The adipose tissue of the rat model group was taken for primary culture of adipocytes. The morphological changes of the cells were observed under the microscope and the cell proliferation activity was detected by flow cytometry. The oil red O staining method was used to identify the cells. The primary adipocytes in each group were divided into 12 groups: normal control group, intermittent hypoxia 4 week control group, intermittent hypoxia 6 week control group and lipopolysaccharide induction group. In normal group, lipopolysaccharide induced intermittent hypoxia for 4 weeks, LPS induced intermittent hypoxia for 6 weeks, TLR4 block in normal group, TLR4 block intermittent hypoxia for 4 weeks, TLR4 block intermittent hypoxia for 6 weeks, p38MAPK block in normal group, P38MAPK block intermittent hypoxia for 4 weeks and p38MAPK block intermittent hypoxia for 6 weeks. The above adipocytes were collected and RT-PCR method was collected. The expression of TLR4, p38MAPK mRNA and protein were detected by the Western-blot method, and the culture fluid of the adipocyte was collected, and the content of leptin in the medium was measured by ELISA.
Results: the blood pressure of the 1 model rats increased gradually, and the pathological changes of OSAS were characterized by the swelling of the cardiac myocytes and the thickening of the renal artery wall, so that the OSAS combined with the hypertensive rat model was successfully established.
2 compared with the normal control group, the serum leptin content in the intermittent hypoxic group was increased in the intermittent hypoxic group for the 4 week group (P0.05, P0.01), and the intermittent hypoxic group increased significantly in the 6 week group (P0.05).
3 compared with the normal control group, the expression of TLR4, p38MAPK mRNA and protein in the adipose tissue of the intermittent hypoxia group for 4 weeks and the intermittent hypoxia group for 6 weeks increased significantly (P0.05, P0.01).
4 the primary rat adipocytes were successfully cultured. The cells were round on the wall for 24 hours. After 3D, the cells became fusiform or multi angle, and 6D entered the exponential growth period. Flow cytometry showed that the cells had the ability to proliferate and differentiate; the cells were differentiated into mature adipocytes, and red O staining could be found in the cells.
5TLR4 mediates the expression of p38MAPK signaling pathway in adipocytes: compared with the control group, lipopolysaccharide can up regulate the expression of TLR4, p38MAPK mRNA and protein (P0.01, P0.05); TLR4 blockers can down regulate the expression of TLR4, p38MAPK mRNA and protein. It is meaningless to express.
The regulation of leptin secretion by the TLR4 mediated p38MAPK signaling pathway in 6 rat adipocytes: compared with the control group, the secretion of leptin in the lipopolysaccharide preconditioning group increased (P0.01), the TLR4 blocker group secreted the leptin decrease (P0.05), and the P38MAPK blocker group secreted leptin (P0.05).
Conclusion: TLR4 mediated p38MAPK signaling pathway is expressed in adipose tissue and adipocytes, and the regulation of adipose factor leptin affects the progression of OSAS combined with hypertension, so as to lay a foundation for further finding more effective treatment methods.

【學位授予單位】：桂林醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R766;R544.1

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本文編號：1855453