本文選題：結(jié)膜囊狹窄 + 動(dòng)物模型��； 參考：《青島大學(xué)》2013年博士論文

【摘要】：目的 探討不同創(chuàng)傷方式引起兔結(jié)膜囊狹窄的特點(diǎn),建立穩(wěn)定的結(jié)膜囊狹窄動(dòng)物模型。應(yīng)用組織工程技術(shù)體外構(gòu)建“結(jié)膜囊移植體”,并探討其治療重度結(jié)膜囊狹窄的效果。 方法 1.結(jié)膜囊狹窄動(dòng)物模型的建立 30只兔隨機(jī)分為4組：熱燒傷組9只,分別用400℃電焊頭逐點(diǎn)燒傷結(jié)膜囊3s、6s和10s；堿燒傷組9只,分別用2M Na0H燒傷結(jié)膜囊30s、60s和120s；酸燒傷組9只,分別用正庚酸原液燒傷結(jié)膜囊60s、120s和180s；眼表上皮切除組3只,切除全部球結(jié)膜、穹窿結(jié)膜和淺層角膜,以及大部分瞼結(jié)膜。術(shù)后觀察結(jié)膜囊的變化,4周后測量結(jié)膜囊深度,判斷結(jié)膜囊狹窄程度,組織病理學(xué)檢查察結(jié)膜創(chuàng)而的修復(fù)情況。 2.應(yīng)用口腔黏膜上皮細(xì)胞體外構(gòu)建組織工程“結(jié)膜囊移植體” 選擇聚乳酸-羥基乙酸共聚物(PLGA)、透明質(zhì)酸鈉交聯(lián)共聚物(CLSH)和羊膜(AM)做為黏膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)的載體材料。取兔煩部口腔黏膜上皮細(xì)胞,體外擴(kuò)增得到足夠數(shù)量的種子細(xì)胞。將細(xì)胞分別接種到三種載體,檢測細(xì)胞在不同載體上的粘附和增殖能力。選擇6只兔,每只兔雙眼鼻上和顳上球結(jié)膜下分別做一直徑10mm囊袋,其中三個(gè)分別植入三種載體材料,另一個(gè)做為空白對照,觀察局部炎癥反應(yīng)和材料的吸收情況,術(shù)后2周和4周分別取材行組織病理學(xué)檢查,觀察材料吸收情況以及局部炎癥反應(yīng)和纖維組織增生情況。選擇一組織相容性好的載體接種口腔黏膜上皮細(xì)胞,然后包覆于塑料薄殼義眼片表面,體外培養(yǎng)7～10天,組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測材料上細(xì)胞生長情況。 3.結(jié)膜囊移植體治療結(jié)膜囊狹窄的初步研究 將6只重度結(jié)膜囊狹窄兔隨機(jī)分成三組,均接受結(jié)膜囊成形手術(shù)治療。A組植入口腔黏膜上皮細(xì)胞體外構(gòu)建的結(jié)膜囊移植體,B組植入以AM和薄殼義眼片構(gòu)建的復(fù)合載體,C組植入單純薄殼義眼片。術(shù)后兩周取出薄殼義眼片,測量結(jié)膜囊深度；一月后再次測量結(jié)膜囊深度,計(jì)算結(jié)膜囊的收縮比例,組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢測結(jié)膜囊上皮的修復(fù)情況以及細(xì)胞的表型變化。 結(jié)果 (一)熱燒傷組術(shù)后球結(jié)膜和穹隆結(jié)膜環(huán)形收縮形成雙結(jié)膜囊結(jié)構(gòu),燒傷1()s者出現(xiàn)眼瞼缺血壞死,術(shù)后4周3例燒傷10s者達(dá)重度結(jié)膜囊狹窄,但均有明顯眼瞼缺損和瞼緣粘連；組織病理學(xué)檢查顯示外結(jié)膜囊內(nèi)結(jié)膜上皮排列紊亂,上皮下膠原纖維增生明顯,而內(nèi)側(cè)結(jié)膜囊內(nèi)大部分結(jié)膜上皮形態(tài)規(guī)整。酸燒傷組術(shù)后24小時(shí)結(jié)膜缺血完全恢復(fù),術(shù)后4周結(jié)膜囊狹窄程度均為輕度；組織病理學(xué)檢查顯示結(jié)膜上皮細(xì)胞形態(tài)良好,結(jié)膜下僅見少許膠原纖維增生。堿燒傷組術(shù)后早期結(jié)膜缺血壞死,72h后部分血運(yùn)逐漸恢復(fù),術(shù)后周兩例180s燒傷者出現(xiàn)角膜穿孔,術(shù)后4周僅1例出現(xiàn)重度結(jié)膜囊狹窄；組織病理學(xué)檢查示殘存結(jié)膜上皮細(xì)胞排列紊亂,結(jié)膜下膠原纖維增生明顯。眼表上皮切除組術(shù)后結(jié)膜囊逐漸縮窄、廣泛瞼球粘連,角膜創(chuàng)面被假性胬肉覆蓋,術(shù)后4周所有結(jié)膜囊狹窄程度均達(dá)重度；組織病理學(xué)檢查示結(jié)膜創(chuàng)面大量膠原纖維增生。 (二)兔口腔黏膜上皮細(xì)胞在六孔板內(nèi)擴(kuò)增一代,可得到1～2×106個(gè)/孔。細(xì)胞在不同材料上的粘附能力分別為CLSHAMPLGA,細(xì)胞在材料上的增殖能力分別為AMPLGACLSH。載體結(jié)膜下植入后,空白對照和AM植入部位1周內(nèi)局部充血完全消退,術(shù)后2周結(jié)膜下AM結(jié)構(gòu)已分辨不清；PLGA和CLSH植入部位結(jié)膜充血逐漸減輕,至術(shù)后4周局部結(jié)膜血管仍明顯擴(kuò)張,結(jié)膜下形成暗紅色結(jié)節(jié)樣腫物,以PLGA較為明顯。組織病理學(xué)檢查示AM植入部位術(shù)后2周僅見少量炎性細(xì)胞浸潤,術(shù)后4周完全消失；CLSH植入部位大量多核巨細(xì)胞浸潤,周圍新生血管和纖維組織增生；PLGA植入部位大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤,周圍纖維組織增生明顯,形成囊樣結(jié)構(gòu)。口腔黏膜L皮細(xì)胞接種到AM后5大,可見克隆形成,包覆義眼片后細(xì)胞克隆繼續(xù)增殖并形成細(xì)胞單層,組織病理學(xué)和免疫組織化學(xué)檢查顯示“結(jié)膜囊移植體”表面均有黏膜上皮細(xì)胞單層形成,CK3和P63染色陽性。 (三)6只兔均成功接受結(jié)膜囊成形手術(shù)。術(shù)后2周取出義眼片后A組結(jié)膜囊深度為10～14mm,B組9.5～13.5mmm,C組8.5～14.5mm；術(shù)后6周A組兔結(jié)膜囊深度為6.～11mm,B組為5～9mmm,C組為3.5～7.5mmm。組織病理學(xué)檢查顯示三組兔重建的結(jié)膜囊均見單層黏膜上皮細(xì)胞覆蓋,部分區(qū)域可見接近正常結(jié)膜上皮結(jié)構(gòu)：免疫組織化學(xué)檢查顯示A組深部結(jié)膜囊少量上皮細(xì)胞CK3和CK4表達(dá)陽性；B和C組CK4表達(dá)陽性,未見CK3表達(dá)。 結(jié)論 眼表切除法可以建立穩(wěn)定的重度結(jié)膜囊狹窄動(dòng)物模型。以AM為載體可以在體外構(gòu)建具有單層黏膜上皮細(xì)胞的結(jié)膜囊移植體,能夠簡化結(jié)膜囊成形手術(shù)操作,在一定程度上有效緩解結(jié)膜囊狹窄。
[Abstract]:Purpose

To investigate the characteristics of rabbit conjunctival sac stenosis caused by different traumatic methods and to establish a stable animal model of conjunctival sac stenosis .

method

1 . Establishment of animal model of conjunctival sac stenosis

Thirty rabbits were randomly divided into four groups : hot burn group ( 9 cases ) , conjunctival sac ( 3s ) , sec ( s ) and 10s respectively with 400 鈩，

本文編號(hào)：1853706