本文選題：小膠質(zhì)細(xì)胞 + 培養(yǎng)��； 參考：《復(fù)旦大學(xué)》2010年碩士論文

【摘要】：目的： 1探討高效的大鼠視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)分離純化的方法,并觀察脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)激活的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)和功能變化。 2研究活化的小膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接蛋白Z0-1和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)表達(dá)的影響。 3觀察活化的小膠質(zhì)細(xì)胞玻璃體腔注射對(duì)大鼠血視網(wǎng)膜屏障(blood-retinal barrier, BRB)的影響。 方法： 1原代培養(yǎng)大鼠視網(wǎng)膜膠質(zhì)細(xì)胞,用振搖法分離純化小膠質(zhì)細(xì)胞并鑒定；用不同濃度的LPS激活小膠質(zhì)細(xì)胞24 h,觀察不同濃度的LPS對(duì)小膠質(zhì)細(xì)胞增殖的影響,并檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞釋放腫瘤壞死因子-a(tumor necrosis factor-alpha, TNF-α)的變化。 2視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞純化后分為3組：A,空白對(duì)照組；B,未激活的小膠質(zhì)細(xì)胞組；C,100 ng/mL LPS激活的小膠質(zhì)細(xì)胞組；然后采用Transwell小室與人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)共培養(yǎng)24 h。用細(xì)胞免疫熒光染色觀察各組HUVECs緊密連接蛋白ZO-1的表達(dá),并用Western Blot方法檢測(cè)各組細(xì)胞VEGF和ZO-1的表達(dá)。 3將大鼠隨機(jī)分為A組、B組和C組。A組,玻璃體腔注射不含小膠質(zhì)細(xì)胞的磷酸鹽緩沖溶液(phosphate buffered solution, PBS); B組,玻璃體腔注射含有未激活小膠質(zhì)細(xì)胞的PBS；C組,玻璃體腔注射含有100 ng/mLLPS激活的小膠質(zhì)細(xì)胞的PBS。7d后用Western Blot方法檢測(cè)小膠質(zhì)細(xì)胞玻璃體腔注射后各組大鼠視網(wǎng)膜Z0-1和VEGF的表達(dá),并觀察伊文思蘭(evans blue, EB)滲透量的變化。 結(jié)果： 1分離純化的小膠質(zhì)細(xì)胞折光性強(qiáng),純度97.6%；LPS活化的小膠質(zhì)細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,特異性標(biāo)記抗體CDllb表達(dá)上調(diào)；濃度100 ng/mL及以下的LPS活化小膠質(zhì)細(xì)胞24 h不影響小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量(P＞0.05),濃度為1000 ng/mL的LPS作用24 h可使小膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量減少(P＜O.05)；濃度低于1 ng/mL的LPS不能誘導(dǎo)視網(wǎng)膜小膠質(zhì)細(xì)胞釋放TNF-α(P0.05);濃度1 ng/mL及以上的LPS均可誘導(dǎo)小膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α(P0.05),并呈劑量遞增趨勢(shì)。 2體外實(shí)驗(yàn)細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果顯示,100 ng/mL LPS活化的小膠質(zhì)細(xì)胞與HUVECs共培養(yǎng)24 h后,HUVECs的Z0-1表達(dá)低于未活化的小膠質(zhì)細(xì)胞作用組和空白對(duì)照組。Western Blot結(jié)果亦顯示,三組細(xì)胞的Z0-1和VEGF蛋白表達(dá)不全相同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,分別F=21.2,F=9.28)；C組Z0-1的表達(dá)低于B組和A組(P＜0.05,分別F=0.07,F=0.12),而VEGF表達(dá)則高于B組和A組(P＜0.05,分別F=0.06,F=0.08)。 3體內(nèi)實(shí)驗(yàn)Western Blot結(jié)果顯示,三組動(dòng)物視網(wǎng)膜的ZO-1和VEGF蛋白表達(dá)不全相同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,分別F=5.70,F=4.63)；玻璃體腔注射活化的小膠質(zhì)細(xì)胞組Z0-1的表達(dá)低于空白對(duì)照組(P＜0.05,F=0.15),而VEGF表達(dá)則高于空白對(duì)照組(P＜0.05,F=0.13)。視網(wǎng)膜EB滲透實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,三組動(dòng)物視網(wǎng)膜EB滲透量不全相同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,F=19.21),C組分別與A組和B組比較,EB滲透量不同,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05,分別F=62.06,F=33.41),C組的EB滲透量大于A組和B組。 結(jié)論： 1本實(shí)驗(yàn)方法培養(yǎng)的小膠質(zhì)細(xì)胞純度高,并建立了活化模型,為小膠質(zhì)細(xì)胞的生理和病理研究奠定了基礎(chǔ)。 2活化的小膠質(zhì)細(xì)胞影響血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)VEGF和ZO-1,可能是導(dǎo)致屏障功能破壞的重要機(jī)制之一 3活化的小膠質(zhì)細(xì)胞可破壞血視網(wǎng)膜屏障,使血管通透性增加。
[Abstract]:Objective:
1 to investigate the efficient method of isolation and purification of rat retinal microglia culture and observe the morphologic and functional changes of microglia activated by lipopolysaccharide (lipopolysaccharide, LPS).
2 the effects of activated microglia on the expression of close connexin Z0-1 and vascular endothelial growth factor (vascular endothelial growth factor, VEGF) in human umbilical vein endothelial cells were investigated.
3 to observe the effect of vitreous injection of activated microglia on blood-retinal barrier (BRB) in rats.
Method錛，

本文編號(hào)：1821417