本文選題：鼻咽癌　切入點(diǎn)：多藥耐藥　出處：《復(fù)旦大學(xué)》2014年博士論文

【摘要】：第一部分：人鼻咽癌標(biāo)本中多種耐藥基因的表達(dá)目的：評估人鼻咽癌標(biāo)本中多種耐藥基因的表達(dá),并初步探討多種耐藥基因的表達(dá)與治療療效之間的關(guān)系。方法：收集2011年4月～2012年4月期間復(fù)旦大學(xué)附屬眼耳鼻喉科醫(yī)院鼻內(nèi)窺鏡室行鼻咽部新生物活檢的鼻咽部標(biāo)本,共172例,其中經(jīng)病理確診為鼻咽癌的標(biāo)本共75例。選擇在我院接受順鉑(Cisplatin,DDP)+5-氟尿嘧啶(Fluorouracil,5-FU)化療的病人,根據(jù)病人的療效將其分為完全緩解(Complete remission, CR)和米完全緩解(nCR)。其中nCR共8例標(biāo)本。在CR中選擇8例病人作為A組,將8例nCR標(biāo)本作為B組。采用實(shí)時熒光定量CR (Real time PCR)檢測標(biāo)本中多藥耐藥基因的表達(dá)情況。檢測基因包括：二氫啼啶脫氫酶(dihydropyrimidine dehydrogenase,DPYD)、胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase, TYMP)、胸腺肽合成酶(thymidylate synthase, TS)、乳清酸轉(zhuǎn)磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(orotate phosphoribosyl transferase, OPRT)、二氫葉酸還原酶(dihydrofolate reductase, DHFR)、亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)、切除修復(fù)互補(bǔ)交叉基因1(excision repair cross complementing gene 1, FRCC1)、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)、血管內(nèi)皮生長因子-A(vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrug resistance relation protein, MRP)、肺耐藥相關(guān)蛋白1(lung-resistance related protein 1, LRP1)、乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(topoisomeerase Ⅱ, TOP2A)。比較A、B兩組標(biāo)本中多藥耐藥基因表達(dá)之間的差異,并初步探討多藥耐藥基因的表達(dá)和治療療效之間的關(guān)系。結(jié)果：所有鼻咽癌標(biāo)本均不同程度表達(dá)多藥耐藥基因。B組鼻咽癌標(biāo)本相比A組而言,ERCC1和TS表達(dá)明顯升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；其他基因表達(dá)差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論：鼻咽癌組織中存在多種多藥耐藥基因的表達(dá),可能是影響鼻咽癌化療療效的重要因素。鼻咽癌的治療療效可能跟ERCC1和TS的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。第二部分：人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究目的：建立人鼻咽癌耐順鉑(DPP)細(xì)胞系HNE1/DDP,并研究其生物學(xué)特性,為后續(xù)體外研究腫瘤耐藥構(gòu)造模型。方法：以DDP為誘導(dǎo)干預(yù)藥物,以人鼻咽癌細(xì)胞HNEl為親代細(xì)胞系,采用了大劑量沖擊法與逐步增加劑量法相結(jié)合的方法,在培養(yǎng)基中逐漸增加DDP的濃度,體外連續(xù)培養(yǎng),建成一株人鼻咽癌耐順鉑的細(xì)胞系,并命名為HNE1/DDP.比較兩利細(xì)胞對鼻咽癌常用化療藥物順鉑,卡鉑,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)和紫杉醇的毒性,觀察耐藥細(xì)胞和親本細(xì)胞之間形態(tài)差異,制作生長曲線,并檢測兩種細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)果：我們歷時1年的時間成功地建立了人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系HNE1/DDP,該細(xì)胞能在含DDPlug/ml的培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長并傳代,其對DDP的耐藥指數(shù)為14.75,并與卡鉑、5-FU和紫杉醇等多種鼻咽癌常用的化療藥物可以產(chǎn)生不同程度的交義耐藥：耐藥細(xì)胞HNE1/DDP相比親本細(xì)胞HNE1增殖速度稍有下降,體外群體倍增時間(doubling time, TD)較親代細(xì)胞稍微延長(41.85 h VS 37.44 h)；但這兩種細(xì)胞在遷移和侵襲能力方面無明顯差別。結(jié)論：成功建立了能在含1ug/ml的順鉑培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長和傳代的人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系HNE1/DDP,該細(xì)胞具有多藥耐藥性,其生物學(xué)特性與親本細(xì)胞基本相似,能作為體外研究腫瘤耐藥的模型。第二部分：人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系的建立及其生物學(xué)特性研究目的：建立人鼻咽癌耐順鉑(DPP)細(xì)胞系HNE1/DDP,并研究其生物學(xué)特性,為后續(xù)體外研究腫瘤耐藥構(gòu)造模型。方法：以DDP為誘導(dǎo)干預(yù)藥物,以人鼻咽癌細(xì)胞HNEl為親代細(xì)胞系,采用了大劑量沖擊法與逐步增加劑量法相結(jié)合的方法,在培養(yǎng)基中逐漸增加DDP的濃度,體外連續(xù)培養(yǎng),建成一株人鼻咽癌耐順鉑的細(xì)胞系,并命名為HNE1/DDP.比較兩利細(xì)胞對鼻咽癌常用化療藥物順鉑,卡鉑,5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)和紫杉醇的毒性,觀察耐藥細(xì)胞和親本細(xì)胞之間形態(tài)差異,制作生長曲線,并檢測兩種細(xì)胞的遷移和侵襲能力。結(jié)果：我們歷時1年的時間成功地建立了人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系HNE1/DDP,該細(xì)胞能在含DDPlug/ml的培養(yǎng)基中穩(wěn)定生長并傳代,其對DDP的耐藥指數(shù)為14.75,并與卡鉑、5-FU和紫杉醇等多種鼻咽癌常用的化療藥物可以產(chǎn)生不同程度的交義耐藥：耐藥細(xì)胞HNE1/DDP相比親本細(xì)胞HNE1增殖速度稍有下降,體外群體倍增時間(doubling time, TD)較親代細(xì)胞稍微延長(41.85 h VS 37.44 h)；但這兩種細(xì)胞在遷移和侵襲能力方面無明顯差別。結(jié)論：成功建立了能在含1ug/ml的順鉑培養(yǎng)液中穩(wěn)定生長和傳代的人鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞系HNE1/DDP,該細(xì)胞具有多藥耐藥性,其生物學(xué)特性與親本細(xì)胞基本相似,能作為體外研究腫瘤耐藥的模型。第三部分：鼻咽癌細(xì)胞多藥耐藥的表達(dá)及藥物逆轉(zhuǎn)研究第三部分：鼻咽癌細(xì)胞多藥耐藥的表達(dá)及藥物逆轉(zhuǎn)研究目的：探討鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞HNE1/DPP和親本細(xì)胞HNE1之間多藥耐藥表達(dá)的差異,并初步研究利多卡因?qū)NE1/DPP細(xì)胞的藥物逆轉(zhuǎn)作用。方法：采用RT-PCR,免疫熒光(Immunofluorescence, IF)和Western-Blot分別從mRNA水平和蛋白質(zhì)水平檢測鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞HNE1/DPP和親本細(xì)胞HNE1之間多種多藥耐藥的表達(dá)。檢測的指標(biāo)如下,二氫嘧啶脫氫酶(dihydropyrimidine dehydrogenase, DPYD)、胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase, TYMP)、胸腺肽合成酶(thymidylate synthase,TS)、乳清酸轉(zhuǎn)磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(orotatephosphoribosyl transferase,OPRT)、二氫葉酸還原酶(dihydrofolate reductase, DHFR)、亞甲基四氫葉酸還原酶(methylenetetrahydrofolate reductase, MTHFR)、切除修復(fù)互補(bǔ)交叉基因1(excision repair cross complementing gene 1, ERCC1)、表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)、血管內(nèi)皮生長因了-A (vascular endothelial growth factor-A, VEGF-A)、多藥耐藥相關(guān)蛋白(multidrug resistance relation protein, MRP)、肺耐藥相關(guān)蛋白1(lung-resistance related Protein 1, LRP1)、乳腺癌耐藥相關(guān)蛋白(breast cancer resistance protein, BCRP)和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱα(topoisomeerase Ⅱ, TOP2A)。同時采用線粒體膜電位法(JC-1),活性氧(ROS)檢測法和流式細(xì)胞儀檢測凋亡法(Annexin V-FICT/PI)初步探索利多卡因逆轉(zhuǎn)HNE1/DPP細(xì)胞對順鉑的耐藥性。結(jié)果：RT-PCR, IF和Western-Blot結(jié)果顯示,多藥耐藥基因在鼻咽癌耐順鉑細(xì)胞HNE1/DPP和鼻咽癌細(xì)胞HNE1中均有不同程度表達(dá),且多種多藥耐藥基因表達(dá)存在差異。在培養(yǎng)液中加入小于毒副作用的利多卡因后,HNE1/DPP細(xì)胞對順鉑的敏感性提高,可以部分逆轉(zhuǎn)該細(xì)胞對順鉑的耐藥性。結(jié)論：HNE1/DPP細(xì)胞的耐藥性可能涉及多種不同的耐藥機(jī)制。利多卡因可以作為一種化學(xué)增敏劑部分逆轉(zhuǎn)HNE1/DPP細(xì)胞對順鉑的耐藥性。
[Abstract]:In the first part , the expression of multiple drug resistant genes in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) specimens was analyzed . The expression of multiple drug resistance genes in nasopharyngeal carcinoma ( NPC ) specimens was evaluated . epidermal growth factor receptor ( EGFR ) , vascular endothelial growth factor - A ( VEGF - A ) , multidrug resistance related protein ( MRP ) , lung - resistance related protein 1 ( LRP1 ) , breast cancer resistance protein , and topoisomerase鈪∥，

本文編號：1679487