本文選題：Butein　切入點(diǎn)：葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞　出處：《吉林大學(xué)》2013年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：葡萄膜黑色素瘤是成人原發(fā)內(nèi)眼腫瘤中最常見(jiàn)的一種腫瘤。在美國(guó)每百萬(wàn)人每年葡萄膜黑色素瘤的發(fā)病率在6-7例，盡管在過(guò)去的幾十年內(nèi)葡萄膜黑色素瘤診斷及治療有新進(jìn)展，但其預(yù)后仍然很差，大約有31%的人在診斷后5年內(nèi)由于葡萄膜黑色素瘤而死亡，25年后將有半數(shù)的病人死亡，這類患者中常見(jiàn)轉(zhuǎn)移，肝臟是轉(zhuǎn)移最好發(fā)的部位。葡萄膜黑色素瘤患者10年累計(jì)轉(zhuǎn)移率達(dá)34%，針對(duì)腫瘤的轉(zhuǎn)移有許多的治療措施，但是收效甚微，葡萄膜黑色素瘤肝轉(zhuǎn)移患者大部分在6個(gè)月內(nèi)死亡，確診轉(zhuǎn)移后平均生存時(shí)間只有3.6個(gè)月。由于葡萄膜黑色素瘤患者預(yù)后極差，急需新的治療措施。 Butein是一種從腰果樹(shù)、降香黃檀和漆樹(shù)中提取的多元酚，在中國(guó)及韓國(guó)曾用來(lái)治療各種疾病，包括胃癌。曾有研究Butein有不同的藥理作用，包括抗氧化、抗炎癥及抗新生血管活性，最近體內(nèi)及體外研究表明Butein有抗癌活性，它能抑制不同種類的惡性腫瘤細(xì)胞的增殖并誘導(dǎo)這些細(xì)胞凋亡。作為有效地防癌及治癌藥物，Butein受到很多關(guān)注，而對(duì)正常細(xì)胞，它的毒性很少。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭�，Butein能抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，另一項(xiàng)胃癌的臨床實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)這種藥物耐受性好，并可能使腫瘤縮小。Butein對(duì)黑色素瘤的作用研究只有針對(duì)鼠皮膚黑色素瘤的實(shí)驗(yàn)，研究發(fā)現(xiàn)Butein可以抑制鼠B16皮膚黑色素瘤細(xì)胞的增殖并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡，而對(duì)人葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞的作用還沒(méi)有報(bào)道，葡萄膜黑色素瘤與皮膚黑色素瘤不僅流行病學(xué)及病因?qū)W不同，分子生物學(xué)模式也不同，所以這兩種黑色素瘤細(xì)胞被認(rèn)為是不同的種類，應(yīng)該對(duì)每種黑色素瘤細(xì)胞進(jìn)行獨(dú)立的研究，本研究的目的是探索Butein的細(xì)胞毒作用，研究在體外對(duì)人類葡萄膜黑色素細(xì)胞瘤可能的防止及治療作用，并研究其對(duì)正常的人類鞏膜成纖維細(xì)胞及視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的作用。Butein誘導(dǎo)葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞生物學(xué)改變，線粒體膜電位的變化后釋放細(xì)胞色素C，活化細(xì)胞凋亡蛋白酶9及3，通過(guò)這些研究闡明了Butein誘導(dǎo)黑色素細(xì)胞的信號(hào)通路。 1方法 三種人葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系(M17、SP6.5和C918)，視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及鞏膜成纖維細(xì)胞與不同濃度的Butein培養(yǎng)，通過(guò)MTT評(píng)價(jià)Butein對(duì)細(xì)胞活力的影響，通過(guò)流式細(xì)胞儀分析細(xì)胞的凋亡，用JC-1酶標(biāo)儀評(píng)價(jià)線粒體膜電位改變，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)分析細(xì)胞凋亡蛋白3、8、9的改變。 2結(jié)果 Butein減少培養(yǎng)的人葡萄膜黑色素瘤的活性，呈劑量依賴效應(yīng)(10、30、100μM)，SP6.5的半數(shù)抑制濃度IC50在13.3μM，M17在15.8μM，在轉(zhuǎn)移的惡性C918細(xì)胞系有類似的劑量，為16.7μM，Butein在較低的濃度時(shí)選擇性的抑制葡萄膜黑色素細(xì)胞的活性，而對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞作用較小，Butein通過(guò)增加線粒體膜通透性及增加細(xì)胞色素C及凋亡蛋白9、3（不通過(guò)凋亡蛋白8）活性誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。 3結(jié)論 30μM Butein誘導(dǎo)培養(yǎng)的人葡萄膜黑色素細(xì)胞凋亡，所以即使都是通過(guò)同一通路引起凋亡，人葡萄膜黑色素瘤與鼠皮膚黑色素瘤細(xì)胞相比前者對(duì)Butein更加敏感。本研究表明100-300μM Butein可以殺傷3種人葡萄膜黑色素細(xì)胞瘤細(xì)胞(M17、SP6.5和C918)。C918細(xì)胞是轉(zhuǎn)移性細(xì)胞系，也可被Butein抑制，表明即使是高度侵入性的葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞系也對(duì)Butein敏感。10μM及30μMButein對(duì)正常的視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞及鞏膜成纖維細(xì)胞無(wú)影響，表明Butein對(duì)葡萄膜黑色素細(xì)胞的特殊抗腫瘤特性。用低濃度Butein培養(yǎng)細(xì)胞后，部分細(xì)胞被膜連蛋白染色，而不被EtD-III染色，提示存在早期的凋亡。用高濃度的Butein處理細(xì)胞后，大部分被膜連蛋白染色，一部分被EtD-III染色，提示凋亡已經(jīng)處于晚期，細(xì)胞膜已經(jīng)損壞。Butein損害了線粒體膜電位，增加了細(xì)胞色素C及凋亡蛋白酶9,3的表達(dá)，并呈劑量依賴性。而凋亡蛋白酶8沒(méi)有明顯改變。這表明Butein是通過(guò)線粒體途徑引起葡萄膜黑色素細(xì)胞瘤凋亡�？傊�，低濃度的Butein可以誘導(dǎo)人葡萄膜黑色素瘤細(xì)胞凋亡而對(duì)正常細(xì)胞影響較小，表明在體外Butein對(duì)人葡萄膜黑色素瘤是一個(gè)選擇性的有效的細(xì)胞凋亡藥物。因?yàn)檗D(zhuǎn)移的黑色素瘤細(xì)胞對(duì)于傳統(tǒng)的化療藥物有很強(qiáng)的抗藥性，，而B(niǎo)utein對(duì)轉(zhuǎn)移的C918細(xì)胞具有殺傷作用，所以Butein可能有望成為具有轉(zhuǎn)移的黑色素瘤細(xì)胞的治療及防治藥物，由于Butein的生物利用度及血漿濃度的研究剛剛起步，有必要進(jìn)一步改變劑型及研究其與其他抗腫瘤藥物的相互作用。
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【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R739.7

【參考文獻(xiàn)】

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1 Steven A. McCormick;;Progress in the studies of etiology,epidemiology and pathogenesis of ocular melanomas[J];Eye Science;2011年01期

本文編號(hào)：1649895