本文關(guān)鍵詞： 阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征 端粒 白細(xì)胞　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2011年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景： 端粒(Telomere)是位于真核生物線(xiàn)性染色體末端的特殊序列,由端粒DNA和端粒結(jié)合蛋白組成,起保護(hù)和穩(wěn)定染色體的作用。 早在20世紀(jì)30年代,諾貝爾獎(jiǎng)得主Hermnn Muller和Barbara Mcclintock就已經(jīng)觀測(cè)到染色體的末端結(jié)構(gòu)在避免染色體之間的融合中起了重要的作用,從而猜測(cè)它可能有保護(hù)染色體的作用。1978年,Blackburn發(fā)現(xiàn)了富含小染色體的模式生物四膜蟲(chóng)的端粒含有許多重復(fù)的5'-CCCCAA-3'六堿基序列,與此同時(shí),Szostak發(fā)現(xiàn)微型染色體在導(dǎo)入酵母后會(huì)很快被降解這一現(xiàn)象,于是這兩位科學(xué)家將四膜蟲(chóng)的CCCCAA序列偶聯(lián)到微型染色體上并導(dǎo)入酵母,結(jié)果發(fā)現(xiàn)這段端粒序列的加入使得微型染色體免受降解,從而證實(shí)了端粒對(duì)染色體的保護(hù)作用。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn),端�？赏ㄟ^(guò)形成t-loop緊湊結(jié)構(gòu),或者與Shelterin等端粒保護(hù)蛋白結(jié)合,從而防止染色體降解、避免末端融合,進(jìn)一步調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng).隨著體細(xì)胞的不斷增殖,端粒會(huì)逐漸縮短,當(dāng)端粒縮短至一定程度,細(xì)胞停止分裂,進(jìn)入靜止?fàn)顟B(tài),故有人稱(chēng)端粒為正常細(xì)胞的“分裂鐘”(mistosis clock). Benetos等對(duì)193例平均年齡為56歲的人群進(jìn)行端粒平均長(zhǎng)度的測(cè)量,發(fā)現(xiàn)端粒長(zhǎng)度與人年齡成負(fù)相關(guān)的關(guān)系；Lee對(duì)猴子外周血單核細(xì)胞測(cè)量端粒長(zhǎng)度發(fā)現(xiàn),端粒每年相應(yīng)縮短62.7 bp。端粒長(zhǎng)度可以作為研究細(xì)胞衰老與生物體年齡的一種很好的方式。 近幾年對(duì)中老年人群中發(fā)生睡眠呼吸暫停綜合征(sleep apnea sylndrome, SAS),尤其是阻塞型睡眠呼吸暫停綜合征(obstructive sleep apnea syndrome, OSAS)的研究越來(lái)越多,國(guó)外對(duì)該病的研究已有30余年,國(guó)內(nèi)也有近20年。SAS是一嚴(yán)重的睡眠呼吸障礙性疾病,是由于某些原因而致上呼吸道阻塞,睡眠時(shí)有呼吸暫停,伴有缺氧、鼾聲、白天嗜睡等癥狀的一種較復(fù)雜的疾病。好發(fā)于肥胖者及中老年人,4050歲年齡段患病率較高,國(guó)外報(bào)道成年男性發(fā)病率為4%,女性發(fā)病率為2%,我國(guó)人群發(fā)病率為3.4%。目前35歲左右的患者發(fā)病也有上升趨勢(shì)。小兒的發(fā)病率約為1%-2%,男女發(fā)病率無(wú)差異,可見(jiàn)于各年齡階段,但以學(xué)齡前期最為多見(jiàn)。 SAS主要臨床表現(xiàn)為睡眠時(shí)打鼾,且鼾聲不規(guī)則,伴有呼吸暫停和呼吸表淺,有時(shí)憋醒,夜間反復(fù)的呼吸暫停和低通氣導(dǎo)致動(dòng)脈血氧飽和度下降和組織缺氧,患者會(huì)表現(xiàn)為夜尿增多,晨起頭痛,白天乏力,嗜睡,嚴(yán)重者還可出現(xiàn)記憶力、智力下降,性格改變和性欲減低,許多研究報(bào)道OSAS會(huì)引致腦血管疾病、精神異常、肺心病和呼吸衰竭,糖尿病,性欲減退等一系列的并發(fā)癥,最直接的就是會(huì)誘發(fā)高血壓,導(dǎo)致冠心�。辉谀X卒中人群中高達(dá)60%。有1/5的心臟病是由睡眠呼吸暫停綜合征引起,其并發(fā)癥造成多臟器功能損害嚴(yán)重者甚至意識(shí)喪失,猝死,嚴(yán)重的影響患者的生活質(zhì)量和壽命。 但目前人們對(duì)OSAS的嚴(yán)重后果不了解,對(duì)OSAS早期預(yù)防、早期診斷與早期治療認(rèn)識(shí)不足,不主動(dòng)前來(lái)就醫(yī),很多病例多是出現(xiàn)嚴(yán)重的心、腦、肺、腎等并發(fā)癥時(shí)才就診,以致錯(cuò)過(guò)治療時(shí)機(jī),睡眠醫(yī)學(xué)是近年來(lái)新興的一門(mén)邊緣學(xué)科,SAS越來(lái)越受到醫(yī)學(xué)界和社會(huì)各界的重視,尤其是OSAS對(duì)機(jī)體影響的研究也越來(lái)越廣泛越深入,對(duì)患者做到健康教育及早期診斷與早期治療是一項(xiàng)非常重要的工作。 有越來(lái)越多的研究報(bào)道說(shuō)明端粒長(zhǎng)度與冠心病、心血管疾病、腫瘤、胃癌、腸癌、肝癌、糖尿病、尿毒癥等疾病有關(guān),所以關(guān)于端粒長(zhǎng)度變化規(guī)律的各種機(jī)制的提出,無(wú)疑是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的重大突破,隨著我們不斷的發(fā)現(xiàn)和掌握端粒長(zhǎng)度及其變化規(guī)律,可以看出通過(guò)端粒長(zhǎng)度估計(jì)個(gè)體的即時(shí)年齡和預(yù)期壽命,闡述衰老機(jī)理；運(yùn)用細(xì)胞端粒長(zhǎng)度蘊(yùn)涵的臨床病理參數(shù)和信息來(lái)調(diào)查缺氧的生物學(xué)行為和發(fā)生模式,把端粒長(zhǎng)度作為缺氧的一種診斷依據(jù)和臨床治療指征;解決OSAS組織工程中細(xì)胞的老化問(wèn)題,為阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)的治療提供理論基礎(chǔ)。 研究目的 探討阻塞性睡眠呼吸暫停綜合征(OSAS)患者外周血白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的變化及意義。 研究對(duì)象 根據(jù)2007年美國(guó)睡眠醫(yī)學(xué)會(huì)(American Academy of Sleep Medicine, AASM)的多道睡眠圖分析標(biāo)準(zhǔn),選擇OSAS患者11例,健康對(duì)照組10例,提取外周血白細(xì)胞DNA,純度檢測(cè)合格后,用Q-PCR法檢測(cè)端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率。 研究方法 1實(shí)驗(yàn)用品 材料 兩組受試者的外周靜脈全血5ml, EDTA抗凝,置于-80℃冰箱中保存待測(cè)；定量PCR專(zhuān)用8聯(lián)管及及管蓋。 試劑Takara Blood Genome DNA Extraction試劑盒,SYBR(?) Premix Ex TaqTMⅡ試劑盒,異丙醇,乙醇,1X TE緩沖液 T反應(yīng)引物：tell GGTTTTTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGTGAGGGGTte12 TCCCGACTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTA S反應(yīng)引物：36b4u CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC 36b4d CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA 設(shè)備水浴箱,紫外分光光度儀,ABI PRISM(?) 7500實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。 2實(shí)驗(yàn)方法 基因組DNA的抽提 采用Takara Blood Genome DNA Extraction試劑盒抽提全血基因組DNA,測(cè)定濃度后,篩選合格標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn),稀釋DNA濃度到約20 ng/μL濃度。 DNA濃度及純度的測(cè)定 采用Eppendof Biophotometer測(cè)定提取的DNA濃度及A260/280比值,選擇合格標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 進(jìn)行PCR反應(yīng)的設(shè)置 T/S比率的計(jì)算 采用熒光定量PCR儀配套軟件,分別確定T反應(yīng)及S反應(yīng)的Ct值——Ct (telomeres)及Ct (36B4),根據(jù)PCR反應(yīng)產(chǎn)物以2的指數(shù)倍遞增原理,T/S比率應(yīng)該接近于公式[2Ct(telomeres)/2Ct(36B4)]-1-2-ΔCt 3統(tǒng)計(jì)方法 所得數(shù)據(jù)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS13.0進(jìn)行分析。組間差異的顯著性分析用兩個(gè)獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。數(shù)據(jù)間的相關(guān)性用Pearson相關(guān)分析法。 結(jié)果 1.端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率的比較 本研究中,OSAS組端粒相對(duì)長(zhǎng)度T/S比率為3494.71±2531.04,健康對(duì)照組端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率為67536.01±87431.93,OSAS組端粒相對(duì)長(zhǎng)度T/S比率較健康對(duì)照組小,二者之間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05) 2.端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率與年齡、BMI、AHI、病程、病情分級(jí)的相關(guān)關(guān)系 OSAS組端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率與年齡、BMI、AHI、病程、病情分級(jí)等均無(wú)顯著的相關(guān)性(P0.05)。健康對(duì)照組端粒長(zhǎng)度相對(duì)T/S比率與年齡呈負(fù)相關(guān),r=-0.713,P=0.021,但與BMI也無(wú)顯著相關(guān)性(P0.05) 結(jié)論 OSAS患者外周血白細(xì)胞端粒長(zhǎng)度的縮短可能與其發(fā)病機(jī)制有關(guān),低氧血癥和高碳酸血癥加速了端粒的損耗和細(xì)胞的凋亡。 OSAS所引起的慢性缺氧和(或)高碳酸血癥可能加速了端粒的損耗和細(xì)胞的凋亡,影響人類(lèi)的健康與壽命,我們應(yīng)當(dāng)積極預(yù)防和治療OSAS。呼吸暫�？蓪�(dǎo)致低氧血癥(P02↓),高碳酸血癥(PCO2T),甚至pH失代償,血氧飽和度可降到60%-80%。嚴(yán)重低氧可引起兒茶酚胺、腎素血管緊張素和內(nèi)皮素分泌增加,微血管收縮,內(nèi)分泌、神經(jīng)調(diào)節(jié)功能失調(diào),血流動(dòng)力學(xué)和流變學(xué)改變,微循環(huán)異常使組織器官缺血、缺氧加重而導(dǎo)致多系統(tǒng)器官損害。目前的研究已知OSAS對(duì)心血管系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、腦血管和中樞神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌和性功能、腎臟和血液系統(tǒng)等存在危害,尚未發(fā)現(xiàn)OSAS與端粒長(zhǎng)度變化的關(guān)系。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2011
【分類(lèi)號(hào)】：R766

【參考文獻(xiàn)】

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1 任甫;李長(zhǎng)勇;席煥久;黃克強(qiáng);溫有鋒;蘇榮健;;人外周血白細(xì)胞端粒DNA長(zhǎng)度與年齡的定量關(guān)系[J];中國(guó)法醫(yī)學(xué)雜志;2007年03期

2 柏智剛;徐平;;兒童阻塞性呼吸睡眠暫停綜合征研究進(jìn)展[J];黑龍江醫(yī)學(xué);2009年10期

3 方杰;劉書(shū)漫;吳景蘭;張欽憲;;胃癌組織端粒長(zhǎng)度的變化[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2006年05期

4 曹東維;張苗;;尿毒癥患者染色體端粒長(zhǎng)度改變的研究[J];軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào);2006年04期

5 趙曉輝;尹揚(yáng)光;黃嵐;;端粒和端粒酶與冠心病[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2006年10期

6 張利敏;穆雙月;耿旭紅;;老年鼾癥患者的動(dòng)態(tài)心電圖分析[J];現(xiàn)代電生理學(xué)雜志;2009年03期

7 鐘天映;陳媛媛;畢利軍;;端粒與端粒酶的研究——解讀2009年諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎(jiǎng)[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2009年10期

8 Brouilette S.W.;Moore J.S.;McMahon A.D.;N.J. Samani;奚群英;;西蘇格蘭冠心病一級(jí)預(yù)防研究中端粒長(zhǎng)度、冠心病風(fēng)險(xiǎn)和他汀類(lèi)藥物治療:一項(xiàng)巢式病例對(duì)照研究[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(心臟病學(xué)分冊(cè));2007年07期

9 楊平勛;黃君健;;端粒及端粒酶的研究進(jìn)展[J];生物技術(shù)通訊;2007年04期

10 鐘英成;羅朋立;靳國(guó)恩;楊慧蓮;韓淑芬;格日力;;熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)端粒長(zhǎng)度[J];臨床和實(shí)驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年04期

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本文編號(hào)：1488315