本文關(guān)鍵詞：小鼠體外視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中PirB的表達(dá)及其對(duì)軸突生長(zhǎng)的作用研究　出處：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：哺乳動(dòng)物成體中樞神經(jīng)損傷后再生的可能性很低,當(dāng)前醫(yī)學(xué)關(guān)注的重點(diǎn)集中在如何促進(jìn)其再生。以往一系列的實(shí)驗(yàn)研究表明,成年人的中樞神經(jīng)軸突損傷后再生十分困難,這主要是與神經(jīng)損傷周圍的微環(huán)境有關(guān)。中樞微環(huán)境中有許多不利于軸突再生的因素,包括神經(jīng)抑制因子、炎癥的發(fā)生和神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的缺乏,其中神經(jīng)抑制因子是最重要的影響因素。髓鞘相關(guān)抑制因子是諸多神經(jīng)抑制因子的代表,主要包括髓鞘相關(guān)蛋白(Nogo-A,MAG和Omgp等)以及這些蛋白的受體/共受體(NgR1,p75,TROY,PirB和Lingo-1等)。這幾種主要神經(jīng)抑制因子(Nogo-A,MAG和Omgp)以NgR為其共同作用受體,MAIs-NgR通路的探索為成體動(dòng)物神經(jīng)損傷后的再生指明了新的方向。但是,一系列的研究發(fā)現(xiàn),將NgR阻斷后,中樞神經(jīng)元軸突的再生能力沒有明顯改善。據(jù)2008年《Science》文章報(bào)道,這幾種主要神經(jīng)抑制因子還存在另一共同受體PirB,它能夠阻抑中樞神經(jīng)元軸突生長(zhǎng),且它阻抑軸突生長(zhǎng)的作用比NgR更強(qiáng)。PirB的發(fā)現(xiàn)源于一項(xiàng)針對(duì)于免疫系統(tǒng)的研究,它被發(fā)現(xiàn)與人類自身IgA的FC受體非常相似,在很多各個(gè)種類的造血系細(xì)胞中均有PirB的出現(xiàn),PirB蛋白的重要功能是可以維持免疫系統(tǒng)功能的穩(wěn)定,保護(hù)正常細(xì)胞組織免受免疫細(xì)胞攻擊和損傷。Josh Syken等學(xué)者進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)了PirB蛋白在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中有表達(dá)。本課題著重進(jìn)行以下三方面的探討:1.確定PirB在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中的表達(dá);2.探討PirB蛋白在體外培養(yǎng)的C57BL/6小鼠的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(RGCs)中的表達(dá)及變化;3.驗(yàn)證PirB調(diào)控體外RGCs生長(zhǎng)的機(jī)制。目的:以PirB受體為主要的研究對(duì)象,研究它在小鼠RGCs軸突生長(zhǎng)中的生理作用。方法:論文以C57BL/6小鼠原代分離的視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞為模型,采用免疫組織化學(xué)熒光的實(shí)驗(yàn)技術(shù)方法確定PirB在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞上的表達(dá);熒光定量PCR和免疫印跡技術(shù)分別檢測(cè)在視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中,PirB和NgR的mRNA和蛋白表達(dá)水平;采用慢病毒轉(zhuǎn)染等方法研究了敲低PirB以及NgR對(duì)體外培養(yǎng)的C57BL/6小鼠RGCs軸突生長(zhǎng)中的作用;通過顯微鏡觀察拍照,記錄統(tǒng)計(jì)不同處理?xiàng)l件下,小鼠RGCs軸突生長(zhǎng)的長(zhǎng)度。本文重點(diǎn)關(guān)注PirB在RGCs中的表達(dá)情況以及阻斷PirB對(duì)RGCs軸突生長(zhǎng)的作用,并探討PirB與NgR可能的協(xié)同作用,主要結(jié)果和結(jié)論如下:1.PirB在體外培養(yǎng)的原代視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞中表達(dá),其表達(dá)水平變化隨著視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的培養(yǎng)時(shí)間呈現(xiàn)一定規(guī)律;2.使用慢病毒轉(zhuǎn)染敲低PirB或NgR后發(fā)現(xiàn),PirB敲低對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞軸突的生長(zhǎng)有一定的改善作用,但同時(shí)阻斷NgR并不會(huì)增益這一效果,而單獨(dú)阻斷NgR不會(huì)顯著改善軸突生長(zhǎng)。此外,聯(lián)用CNTF后,阻斷了PirB的RGCs軸突生長(zhǎng)得到進(jìn)一步改善。本研究有助于深入對(duì)視神經(jīng)損傷再生機(jī)制的理解,提供新的視神經(jīng)損傷治療靶點(diǎn),為成體視神經(jīng)損傷治療提供新的思路。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R774.1

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本文編號(hào)：1320520