本文關鍵詞：氯離子通道蛋白-3和水離子通道蛋白-1在糖皮質激素性白內障晶狀體中表達水平變化的研究

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【摘要】：目的： 糖皮質激素已經廣泛、有效的應用于臨床工作中。長時間全身、局部應用糖皮質激素可以發(fā)揮抗炎抗免疫等有益作用，但是同時也帶來巨大副作用，而糖皮質激素性白內障（glucocorticoid induced cataract,GIC）是其在眼部較常見的并發(fā)癥之一。本實驗采用建立糖皮質激素性白內障離體培養(yǎng)模型，觀察離體培養(yǎng)的晶狀體在不同的藥物濃度地塞米松影響下的混濁程度，同時研究不同濃度的地塞米松對晶狀體中氯離子通道蛋白-3mRNA（CLC-3mRNA）與水離子通道蛋白-1mRNA（AQP-1mRNA）的表達的影響。探討CLC-3和AQP-1與糖皮質激素性白內障的發(fā)病關系，為進一步激素性白內障的研究提供理論依據。 方法： 建立大鼠離體晶狀體糖皮質激素性白內障模型：取3月齡雌性新鮮的大鼠晶狀體共144只，隨機分為3組（每小組42只晶狀體）：對照組（給予不含地塞米松的培養(yǎng)液孵育）,實驗組1（給予含5mmol/L地塞米松培養(yǎng)液孵育）,實驗組2（給予含10mmol/L地塞米松培養(yǎng)液孵育）。孵育條件各組均相同。分別于第1,3,5,7天隨機抽取12只晶狀體，觀察并記錄晶狀體形態(tài)及混濁程度，采用實時熒光定量PCR法檢測各組晶狀體中CLC-3mRNA和AQP-1mRNA含量的變化。 結果： 1.成功建立大鼠離體晶狀體糖皮質激素性白內障模型，并進行相應分期分組。 2.觀察晶狀體混濁程度（參考Mathur等[1]離體晶狀體的分級方法）： 2.1對照組晶狀體均未出現(xiàn)混濁 2.2實驗組1（5mmol/L）：晶狀體第1天未出現(xiàn)混濁，第3天大部分晶狀體呈現(xiàn)1級混濁(11/12)，第5天大部分晶狀體呈現(xiàn)2級混濁(10/12)，第7天晶狀體呈現(xiàn)3級混濁(10/12)；第3，5，7天分別與同期相應的對照組相比，晶狀體混濁程度間差異均有顯著性(P0.01)；第1,3,5,7天各相鄰時間點之間相比晶狀體混濁程度間差異均有顯著性（P0.01，P0.05）。 2.3實驗組2（10mmol/L）：晶狀體第1天未出現(xiàn)混濁，第3天晶狀體大部分呈現(xiàn)2級混濁(10/12)，第5天晶狀體大部分呈現(xiàn)3級混濁(3級9/12，4級2/12）第7天晶狀體呈現(xiàn)兩種程度混濁混濁（4級8/12,5級4/12)，第3，5，7天分別與同期相應的對照組相比，晶狀體混濁程度間差異均有顯著性(P0.01)；第1,3,5,7天各相鄰時間點之間相比晶狀體混濁程度間差異均有顯著性（P0.01，P0.05）。 3.實時熒光定量PCR檢測結果示： 3.1CLC-3mRNA表達的觀察： 3.1.1對照組、實驗組1（5mmol/L）及實驗組2（10mmol/L）晶狀體中均有CLC-3mRNA基因的表達。 3.1.2對照組CLC-3mRNA表達量在體外培養(yǎng)第1,3,5,7天各時間點無明顯變化（p＞0.05）。 3.1.3實驗組1（5mmol/L）：CLC-3mRNA表達量于第3、5、7天逐漸增高，與同期相應對照組相比，差異有顯著性（p＜0.01）；并且各時間點相比差異均有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）； 3.1.4實驗組2（10mmol/L）：CLC-3mRNA表達含量于第3天開始增高，第5天時達到高峰，與同期相應對照組相比，差異有顯著性（p＜0.01），第7天時明顯下降，降至正常值的50%，差異有顯著性（p＜0.01）；并且各時間點相比差異均有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）。 3.1.5實驗組2（10mmol/L）與同期相應實驗組1（5mmol/L）相比：第3天,第5天CLC-3mRNA表達量明顯增高，第7天明顯降低，變化呈藥物濃度依賴性，差異有顯著性（p＜0.01）。 3.1.61、2和3級晶狀體中CLC-3mRNA的表達量呈逐漸增高趨勢，且均高于透明晶狀體（p＜0.01），3級晶狀體中CLC-3mRNA的表達量最高，4級和5級時其表達量呈逐漸遞減趨勢，且均低于透明晶狀體組，5級時CLC-3mRNA的表達量最低，降至透明晶狀體的50%，差異有顯著性（p＜0.01）。 3.2AQP-1mRNA表達的觀察： 3.2.1對照組、實驗組1（5mmol/L）及實驗組2（10mmol/L）晶狀體中均有AQP-1mRNA基因的表達。 3.2.2對照組AQP-1mRNA表達量在體外培養(yǎng)第1,3,5,7天各時間點無明顯變化（p＞0.05）。 3.2.3實驗組1（5mmol/L）：AQP-1mRNA表達量于第3、5、7天逐漸降低，與同期相應對照組相比，差異有顯著性（第3天與同期相應對照組比p＜0.05）（第5、第7天與同期相應對照組比p＜0.01）。并且各時間點相比差異均有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）； 3.2.4實驗組2（10mmol/L）：AQP-1mRNA表達量于第3、5、7天逐漸降低，與同期相應對照組相比，差異有顯著性（p＜0.01）。并且各時間點相比差異均有統(tǒng)計學意義（p＜0.01）； 3.2.5實驗組2（10mmol/L）與同期相應實驗組1（5mmol/L）相比：AQP-1mRNA的表達水平均明顯降低，，變化呈藥物濃度依賴性，差異有顯著性（p＜0.01）。 3.2.61～5級晶狀體中AQP-1mRNA表達量呈逐漸降低趨勢，且均低于透明晶狀體。2～5級晶狀體AQP-1mRNA表達量與透明晶狀體相比差異有顯著性（p＜0.01）。 結論： 1.大劑量糖皮質激素應用在短期內即可造成晶狀體的混濁，并且晶狀體的混濁程度與糖皮質激素的濃度和應用時間長短均呈現(xiàn)正相關。 2.體外培養(yǎng)晶狀體中有CLC-3mRNA的表達，在激素性白內障模型中，隨著晶狀體混濁程度增加其表達量呈現(xiàn)遞增趨勢并且達到峰值后出現(xiàn)驟降，提示CLC-3mRNA與激素性白內障發(fā)生及發(fā)展密切相關：隨著白內障混濁程度的增加，CLC-3不斷激活，但是當混濁達到一定程度后CLC-3激活達到極限，隨后逐漸失活，證實其對一定程度的晶狀體混濁起保護作用。 3.體外培養(yǎng)晶狀體中有AQP-1mRNA表達，在激素性白內障模型中，隨著晶狀體混濁程度增加其表達量呈現(xiàn)遞減趨勢，且其降低程度與藥物濃度和作用時間均呈現(xiàn)正相關，提示AQP-1與糖皮質激素發(fā)生及發(fā)展密切相關：糖皮質激素類藥物在某種程度上對晶狀體中AQP-1有抑制作用，且藥物濃度越高，作用時間越長，其抑制作用越強。 本實驗的創(chuàng)新點： 1.首次采用實時熒光定量PCR方法從基因水平對離體培養(yǎng)的晶狀體激素性白內障中CLC-3mRNA及AQP-1mRNA進行檢測。 2.在激素性白內障的研究中，按照混濁級別不同分別對于CLC-3mRNA及AQP-1mRNA表達量進行了分析。
【學位授予單位】：大連醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R776.1

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據庫 前2條

1 彭潔;水通道蛋白1與角膜內皮[J];眼科新進展;2003年06期

2 葉天才，劉東光，余敏斌，孫桂珍;糖皮質激素性白內障93例臨床分析[J];中華眼科雜志;1995年06期

本文編號：1275515