本文關鍵詞：敏感性分子開關檢測高度近視ZNF644基因突變

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【摘要】：目的：采用雙硫代磷酸化修飾的特異性檢測引物耦合Pfu高保真DNA聚合酶構成的突變敏感性分子開關，檢測高度近視患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突變位點。 方法：根據(jù)ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）兩個突變點在基因序列中的位置，構建野生型與突變型重組質(zhì)粒作為研究模板。分別設計與野生型和突變基因位點配對的引物，采用雙硫化磷酸修飾引物3′末端,耦合Pfu高保真DNA聚合酶構成的突變敏感性分子開關，對突變型及野生型質(zhì)粒模板進行引物延伸反應，利用凝膠成像系統(tǒng)對其PCR產(chǎn)物進行分析。通過調(diào)節(jié)PCR反應過程中退火溫度，優(yōu)化PCR反應條件，，建立敏感性分子開關檢測高度近視ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變的方法，并將該方法用于篩查12位高度近視志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變。 結果：當檢測引物與模板完全匹配時，引物被延伸，有PCR產(chǎn)物，引物與模板不完全匹配時，引物不被延伸，則無PCR產(chǎn)物。在提高PCR反應退火溫度條件下敏感性分子開關特異性提高，62℃退火溫度下可特異性檢測出質(zhì)粒模板ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變位點。使用該方法對12例臨床高度近視志愿者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y（2238G＞A）突變的篩查未發(fā)現(xiàn)突變。 結論：突變敏感性分子開關可用于篩查高度近視患者ZNF644基因c．725C＞T，C699Y （2238G＞A）突變。
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R778.11

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：1189383