本文關(guān)鍵詞：1,25二羥維生素D3對穿透性角膜移植小鼠T淋巴細(xì)胞的實驗研究

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【摘要】：目的 本研究旨在探討1，25二羥維生素D3對穿透性角膜移植聯(lián)合皮膚移植模型小鼠免疫排斥反應(yīng)的影響，進一步探討1，25二羥維生素D3對小鼠免疫系統(tǒng)T淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。 方法 實驗以C57BL/6小鼠為受體，以Balb/c小鼠為供體，按照完全隨機分組設(shè)計將實驗分成對照組、移植組和干預(yù)組。建立小鼠穿透性角膜移植聯(lián)合皮膚移植的動物模型，干預(yù)組小鼠隔日腹腔注射溶解于1，25二羥維生素D3的花生油，，劑量為10ng，移植組和對照組小鼠隔日腹腔注射同等劑量的生理鹽水。手術(shù)后每天在裂隙燈下觀察角膜植片的情況，肉眼下觀察皮膚植片的情況。 在移植術(shù)后的第13天，取三組小鼠外周血，行流式檢測外周血中γδT淋巴細(xì)胞和CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T淋巴細(xì)胞的差異性，探討1，25二羥維生素D3對這兩種細(xì)胞的調(diào)節(jié)作用。 移植術(shù)后第13天，稱重后處死三組小鼠，然后取三組小鼠的脾臟，稱重后計算脾臟/體重百分比，然后用淋巴細(xì)胞分離液獲取脾臟淋巴細(xì)胞，采用Trizol法提取淋巴細(xì)胞總RNA后進行逆轉(zhuǎn)錄過程，然后進行熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)，觀察三組小鼠脾臟淋巴細(xì)胞中Th1相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γmRNA和IL-2mRNA，Th2相關(guān)的IL-10mRNA，Th17相關(guān)的IL-17AmRNA的表達的差異性，推斷1，25二羥維生素D3對各種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用。 統(tǒng)計學(xué)分析：所有的實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示，應(yīng)用SPSS19.0進行方差分析，P＞0.05認(rèn)為差異無統(tǒng)計學(xué)意義，P＜0.05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1，25二羥維生素D3干預(yù)組小鼠的角膜植片和皮膚植片的生存時間較移植組要長，移植物小鼠的外周血中γδT細(xì)胞的比例明顯高于對照組和干預(yù)組，干預(yù)組小鼠γδT細(xì)胞的比例高于對照組，1，25二羥維生素D3對小鼠外周血的γδT細(xì)胞具有一定的下調(diào)作用，移植組小鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞明顯低于對照組和干預(yù)組，干預(yù)組小鼠外周血中CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的比例高于對照組，1，25二羥維生素D3對CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞具有一定的上調(diào)的作用。就脾臟淋巴細(xì)胞而言，移植組Th1相關(guān)的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表達高于對照組和干預(yù)組，干預(yù)組高于對照組，移植組Th17相關(guān)的IL-17AmRNA的表達高于對照組和干預(yù)組，干預(yù)組高于對照組，干預(yù)組Th2相關(guān)的IL-10mRNA的表達高于移植組和對照組，干預(yù)組高于移植組，三組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。1，25二羥維生素D3可以下調(diào)脾臟淋巴細(xì)胞中Th1相關(guān)的IFN-γmRNA和IL-2mRNA的表達，下調(diào)Th17相關(guān)的IL-17AmRNA的表達，上調(diào)Th2相關(guān)的IL-10mRNA的表達。 結(jié)論 這些結(jié)果說明1,25二羥維生素D3可能對小鼠同種異體角膜移植的免疫排斥反應(yīng)具有抑制作用，通過上調(diào)對免疫排斥反應(yīng)具有抑制作用的CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的數(shù)量，下調(diào)對免疫排斥反應(yīng)具有促進作用的γδT細(xì)胞的比例。1，25二羥維生素D3對促進炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子IFN-γmRNA、IL-2mRNA和IL-17AmRNA的表達具有抑制作用，1，25二羥維生素D3對抑制炎癥反應(yīng)相關(guān)的細(xì)胞因子IL-10mRNA的表達具有上調(diào)作用。
【學(xué)位授予單位】：暨南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R779.65

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本文編號：1136718