本文關(guān)鍵詞：CK13基因反義寡核苷酸對(duì)鼻咽癌HNE1細(xì)胞株放療敏感性的影響

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【摘要】：目的： 本文探討CK13基因反義寡核苷酸對(duì)鼻咽癌HNE1細(xì)胞株放療敏感性的影響。采用慢病毒載體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染方法,將攜帶CK13反義寡核苷酸的CK13質(zhì)粒和空載體質(zhì)粒(pEGFP-N1)轉(zhuǎn)染至HNE1細(xì)胞中,分析研究CK13基因?qū)?xì)胞周期的影響及對(duì)鼻咽癌的放射效果,探索一種安全、有效的鼻咽癌治療新策略,以期在鼻咽癌治療方面獲得突破性進(jìn)展。 方法： 1、目的基因的制備：合成CK13反義寡核苷酸片段；重組DNA;轉(zhuǎn)染；篩選。 2、攜帶CK13基因反義核苷酸片段的質(zhì)粒CK13和空載體質(zhì)粒(pEGFP-N1)的轉(zhuǎn)化、擴(kuò)增、酶切與測(cè)序鑒定分析。 3、慢病毒介導(dǎo),將CK13反義核苷酸,空載體質(zhì)粒pEGFP-N1轉(zhuǎn)染至HNE1細(xì)胞中。分別命名為Anti-CK13組、lenti virus組以及未轉(zhuǎn)染的HNE1鼻咽癌細(xì)胞株命名為control組。應(yīng)用RT-qPCR, Westen blotting等分子生物學(xué)方法測(cè)定細(xì)胞內(nèi)目的基因的表達(dá)。 4、克隆形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定細(xì)胞劑量存活分?jǐn)?shù),采用線性二次函數(shù)模型(L-Q模型)和單擊多靶模型擬合細(xì)胞輻射劑量存活曲線,分別求出三組的放射生物學(xué)參數(shù)。 5、體外觀察放射治療對(duì)轉(zhuǎn)染細(xì)胞的殺傷作用。 結(jié)果： 1、鼻咽癌HNE1細(xì)胞培養(yǎng)狀況良好,設(shè)計(jì)出的CK13反義序列包含了合理的反義寡核苷酸序列——5' CACCTCCATAGCCACCTCCA3',對(duì)于細(xì)胞內(nèi)CK13的沉默起到重要作用。 2、攜帶CK13反義寡核苷酸的質(zhì)粒CK13和空載體質(zhì)粒(pEGFP-N1)滿足實(shí)驗(yàn)要求。qPCR結(jié)果顯示,感染CK13反義序列的HNE1細(xì)胞的CK13的mRNA水平相對(duì)于正常的HNE1細(xì)胞表達(dá)水平為其0.284倍,表達(dá)明顯降低,差異具有顯著性(P0.05)。 3、單擊多靶模型和線性二次函數(shù)擬合輻射劑量存活曲線結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染反義CK13基因后,D0、Dq、SF2均增加,α值、α/β均減小,說(shuō)明CK13基因的沉默降低了HNE1細(xì)胞的放射敏感性。X線照射后,空白細(xì)胞組和陰性對(duì)照組的各組放射生物學(xué)參數(shù)均相似,說(shuō)明兩組細(xì)胞的放射敏感性無(wú)顯著性變化。而在相同放射劑量下,與轉(zhuǎn)染空載體和空白細(xì)胞相比,轉(zhuǎn)染反義CK13基因后的細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)升高；吉姆薩染色后統(tǒng)計(jì)各組細(xì)胞形成克隆情況,結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染反義CK13組的克隆形成數(shù)和形成率明顯大于空質(zhì)粒組和空白細(xì)胞組,且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 結(jié)論： CK13基因反義寡核苷酸能明顯降低鼻咽癌HNE1細(xì)胞株的放射敏感性。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.63

【參考文獻(xiàn)】

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