本文關(guān)鍵詞：AFDX-116對(duì)體外培養(yǎng)人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞調(diào)控的研究

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【摘要】：近視是一種最常見的世界性眼科疾病，在歐美，大約有三分之一的美國成年人患有不同程度的近視[1]，隨著經(jīng)濟(jì)的發(fā)展，在一些亞洲國家人群中，近視的患病率逐漸增高且近年來有逐漸超過歐美西方國家的趨勢(shì)[2]。作為結(jié)締組織，鞏膜由鞏膜成纖維細(xì)胞以及鞏膜細(xì)胞外基質(zhì)中的膠原蛋白組成，鞏膜成纖維細(xì)胞及膠原成分在眼球正常生長發(fā)育過程以及近視發(fā)生過程鞏膜重塑中發(fā)揮極其重要的作用。鞏膜成纖維細(xì)胞在鞏膜組織結(jié)構(gòu)和生物學(xué)特性方面起到重要作用，鞏膜重塑過程即由鞏膜成纖維細(xì)胞參與完成，當(dāng)發(fā)生近視后，患者鞏膜成纖維細(xì)胞減少，膠原纖維變細(xì)，鞏膜變薄。近年來多項(xiàng)研究表明，在近視發(fā)生發(fā)展過程中，成纖維細(xì)胞中膠原蛋白水平的變化對(duì)鞏膜重塑起著重要作用[3-5]。由此，對(duì)鞏膜成纖維細(xì)胞數(shù)量及膠原蛋白含量在近視發(fā)生發(fā)展過程中的變化加以研究，從而進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)新型藥物以抑制近視發(fā)展對(duì)于近視的治療意義重大。 在近視患者中，為了有效抑制近視的發(fā)展，經(jīng)過較大量的臨床觀察以及實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，選擇性M1受體拮抗劑哌侖西平和非選擇性M受體拮抗劑阿托品在抑制近視發(fā)生發(fā)展方面療效確切并在臨床中得到廣泛的應(yīng)用[6]。M1-M5五種M受體亞型在鼠、人眼鞏膜組織中均有表達(dá)[7]，近年來研究證明，除了阿托品和哌侖西平，選擇性M4受體拮抗劑也可作用于鞏膜成纖維細(xì)胞和鞏膜膠原蛋白從而延緩近視發(fā)生發(fā)展進(jìn)程，同時(shí)發(fā)現(xiàn)，M2受體在近視過程中也可起到相應(yīng)的作用[14]。此次實(shí)驗(yàn)選取人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞，對(duì)該細(xì)胞中M2受體是否表達(dá)進(jìn)行檢測，同時(shí)觀察經(jīng)選擇性M2受體拮抗劑AFDX-116作用于細(xì)胞后， M2受體的表達(dá)量、細(xì)胞增殖的數(shù)量以及I型膠原合成量所發(fā)生的變化。探討人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞細(xì)胞M2受體在近視發(fā)生發(fā)展過程中的作用以及其選擇性拮抗劑AFDX-116在近視發(fā)生發(fā)展過程中所起的作用和作用機(jī)制。 目的 檢測人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞（human fetal scleral fibroblasts, HFSFs）中毒蕈堿乙酰膽堿能M2受體的表達(dá)，觀察經(jīng)AFDX-116藥物刺激后，M2受體在細(xì)胞的表達(dá)量、鞏膜細(xì)胞數(shù)量以及I型膠原蛋白合成量的變化，探討AFDX-116在近視過程當(dāng)中所起的作用及作用機(jī)制。 方法 取5-7代HFSFs，分為兩組，實(shí)驗(yàn)組：接受AFDX-116刺激，培養(yǎng)液中藥物終濃度分別為0.1μmol/L、1μmol/L、10μmol/L、100μmol/L，對(duì)照組：不接受藥物刺激，僅加入等體積的培養(yǎng)液。逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（ReversTranscription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR）法檢測對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組HFSFsM2受體mRNA相對(duì)表達(dá)量及表達(dá)量變化；CCK8(Cell Counting Kit-8)法檢測對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組HFSFs增殖變化情況，于酶標(biāo)儀450nm檢測吸光值（OD值）；免疫熒光(Immunofluorescence,IF)法對(duì)對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組HFSFs I型膠原蛋白（COL1A1）在細(xì)胞中的表達(dá)進(jìn)行觀察。 結(jié)果 1．M2受體mRNA在HFSFs的表達(dá)及變化 對(duì)照組HFSFs可檢測到M2受體mRNA的表達(dá)，其相對(duì)表達(dá)量為0.372±0.022，實(shí)驗(yàn)組HFSFs在AFDX-1161μmol/L(0.418±0.007)、10μmol/L(0.579±0.035)、100μmol/L(0.768±0.042)濃度下，其M2受體mRNA相對(duì)表達(dá)量有所增高，，與對(duì)照組相比，差異具統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.029、0.001、0.000）；在AFDX-1160.1μmol/L（0.391±0.018）濃度下M2受體mRNA相對(duì)表達(dá)量未觀察到明顯變化，與對(duì)照組相比，差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.327）。 2．HFSFs增殖變化 對(duì)照組HFSFs OD值為0.820±0.048，實(shí)驗(yàn)組HFSFs在AFDX-1161μmol/L（0.725±0.078）、10μmol/L（0.690±0.053）、100μmol/L（0.612±0.042）濃度下OD值均有不同程度的降低，差異較對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.049、0.004、0.000）；在AFDX-1160.1μmol/L（0.802±0.078）濃度下OD值僅輕度下降，較對(duì)照組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.745）。 3．COL1A1表達(dá)變化 IF結(jié)果顯示AFDX-116可促進(jìn)HFSFs COL1A1分泌，對(duì)照組HFSFs可檢測到COL1A1表達(dá)，實(shí)驗(yàn)組HFSFs在AFDX-1160.1μmol/L濃度下未觀察到明顯的COL1A1分泌增多，在AFDX-1161μmol/L、10μmol/L、100μmol/L濃度下COL1A1表達(dá)較對(duì)照組可觀察到不同程度的增加。 結(jié)論 1．M2受體在體外培養(yǎng)的人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞中可檢測到穩(wěn)定表達(dá)。 2．選擇性M2受體拮抗劑AFDX-116在促進(jìn)人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞M2受體表達(dá)、抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)I型膠原蛋白表達(dá)方面可發(fā)揮顯著作用。 3．M2受體可能參與了近視的發(fā)生發(fā)展過程。
【關(guān)鍵詞】：AFDX-116M2受體 人胚胎眼鞏膜成纖維細(xì)胞 細(xì)胞增殖I型膠原蛋白
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R778.11
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-12
• 英文縮寫一覽表12-13
• 引言13-15
• 材料和方法15-21
• 結(jié)果21-23
• 討論23-28
• 結(jié)論28-29
• 附圖29-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述部分 視網(wǎng)膜乙酰膽堿能遞質(zhì)系統(tǒng)與近視的關(guān)系及研究進(jìn)展35-53
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 個(gè)人簡歷及在校期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文53-54
• 致謝54

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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本文編號(hào)：1114553